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浙江大学学报(农业与生命科学版). 2020 (2): 135-.
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利用TaqMan微流控阵列同步检测多种动物源性成分
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虞惠贞,侯寒黎,尹文秀,张荃,孙超,张明哲,张晓峰,苗丽,吴姗
浙江大学学报(农业与生命科学版). 2020 (2): 189-200.
DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2019.04.221
利用TaqMan微流控阵列(TaqMan? array microfluidic card)技术,将24种(类)动物物种的实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)的引物探针集合在同一个阵列上,以实现多物种高通量同步检测,并对该方法的重复性、特异性和灵敏度进行验证。用变异系数(coefficient of variation, CV)表示一块阵列板内,同一物种成分检测的重复性。结果显示:66个CV值中,11个低于1%,15个大于2%,其余40个介于1%~2%之间,没有一个物种成分的CV值高于3%。P值显示的是不同阵列板间同一成分检测的重复性,22个物种成分的P值只有1个小于0.05,显示为板间存在差异,其他21种成分的板间差异均未达到显著水平。因此,本研究对多数物种成分的检测,不论板内还是板间都有较好的重复性。特异性检测中未发现TaqMan微流控阵列中出现假阳性的结果,但有2种成分的检测出现了假阴性。TaqMan微流控阵列的检测灵敏度没有高于单重荧光定量PCR,在22个检测样品中,10个物种成分检测的灵敏度降为原来的10%,1个甚至降低为原来的1%,其余11个灵敏度和单重荧光保持一致。总体而言,TaqMan微流控阵列技术在重复性、特异性和灵敏度方面都能满足物种成分真伪鉴定的需求,为同步鉴定多种动物源性成分提供了一种新的方法。
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上笼应激对绍兴鸭十二指肠组织结构、抗氧化能力及基因mRNA表达量的影响
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顾天天,田勇,周玮,刘国发,陈黎,曾涛,吴信生,徐琪,陈国宏,卢立志
浙江大学学报(农业与生命科学版). 2020 (2): 234-242.
DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2019.06.181
将80只200日龄的绍兴蛋鸭随机分为2组,即地面平养组和上笼应激组,在上笼后第1、2、4、7和10天对十二指肠的组织损伤程度以及抗氧化等指标进行测定,并通过实时荧光聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, RT-PCR)检测内质网应激、炎症和凋亡相关基因mRNA的相对表达量,为蛋鸭的规模化养殖和上笼应激诱发症的科学防预提供理论依据。结果发现:1)随着上笼应激时间的增加,试验组十二指肠的损伤程度逐渐增加,主要表现为炎症细胞浸润和肠腺上皮细胞脱落。 2)上笼应激过程中,试验组十二指肠丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量,总抗氧能力(total antioxidant capacity, T-AOC)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性呈现波动性变化,而过氧化氢酶(catalase, CAT)活性在上笼应激后第7天显著增加(P<0.05)。3)RT-PCR检测结果显示:与对照组相比,内质网应激相关基因葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein, CHOP) mRNA表达水平呈现波动性变化,且在上笼后第2和10天显著增加(P<0.05);凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax) mRNA表达水平在上笼后第7和10天显著增加(P<0.05),而半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cysteinecontaining aspartate-specific proteases-3, Caspase3) mRNA表达量较对照组差异不显著(P>0.05);炎症相关基因环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2) mRNA水平显著上调,且在上笼后第10天显著增加(P<0.05),而诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide, iNOS)表达水平则呈现先下降后上升的趋势。综上表明,上笼应激过程引起绍兴鸭十二指肠不同程度的组织损伤,同时内质网应激强度上调,最终导致细胞凋亡和炎症反应的产生。
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2种养殖模式下美洲鲥当年鱼种营养成分比较及品质评价
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刘永士,蒋飞,施永海
浙江大学学报(农业与生命科学版). 2020 (2): 243-253.
DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2019.02.211
为了解敞口池塘(敞池组)和遮阴池塘(遮阴组)养殖的美洲鲥当年鱼种鱼体营养成分的差异,采用生化分析方法对2种养殖模式的美洲鲥当年鱼种鱼体进行营养成分分析,并对其营养品质进行分析和比较。结果显示:遮阴组美洲鲥当年鱼种鱼体水分含量(69.22%)显著低于敞池组(70.68%)(P<0.05),粗脂肪含量(10.79%)显著高于敞池组(7.48%)(P<0.05),粗蛋白和粗灰分含量在2组间未有显著差异(P>0.05)。在检测到的18中氨基酸中,有7种氨基酸(天门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸)的含量为敞池组显著高于遮阴组(P<0.05),其余11种氨基酸(苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸、色氨酸、胱氨酸)的含量在2组间差异不显著(P>0.05);敞池组的氨基酸总量(total amino acid, TAA)、非必需氨基酸(non-essential amino acid, NEAA)和鲜味氨基酸(delicious amino acid, DAA)占鱼体干质量百分比均显著高于遮阴组(P<0.05);2组的必需氨基酸(essential amino acid, EAA)、半必需氨基酸(half-essential amino acid, HEAA)占鱼体干质量百分比及EAA/TAA、EAA/NEAA、DAA/TAA未有显著差异(P>0.05),遮阴组和敞池组的鱼体必需氨基酸指数(essential amino acid indexes, EAAI)分别为76.49和76.46。敞池组鱼体饱和脂肪酸(saturated fatty acid, SFA)总量(35.91%)显著高于遮阴组(27.70%)(P<0.05),而多不饱和脂肪酸(poly-unsaturated fatty acid, PUFA)总量(13.66%)显著低于遮阴组(21.35%)(P<0.05);单不饱和脂肪酸(mono-unsaturated fatty acid, MUFA)和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)+二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)总量在2组间未有显著差异 (P>0.05)。研究表明,敞口池塘养殖的美洲鲥当年鱼种鱼体蛋白质品质略优于遮阴养殖,而遮阴池塘养殖的美洲鲥当年鱼种鱼体的脂肪酸品质更优,建议优化配合饲料脂肪酸结构,提高PUFA含量,尤其是EPA和DHA的含量。
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