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浙江大学学报(农业与生命科学版). 2023 (1): 1-140.
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50 )
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139
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不同激素处理下番茄实时荧光定量聚合酶链反应内参基因的筛选
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白圣懿,王晓敏,刘文娟,程国新,郭猛,姚文孔,高艳明,李建设
浙江大学学报(农业与生命科学版). 2023 (1): 31-44.
DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2022.03.081
为筛选出在不同激素诱导下番茄中较为稳定的内参基因,本研究以脱落酸(abscisic acid, ABA)、茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)、水杨酸(salicylic acid, SA)3种外源激素分别诱导处理0、24、48、120 h的感病番茄品种‘Moneymaker’(MM)和抗病番茄自交系62579叶片为试验材料,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)进行扩增,利用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3个软件分析EF1α、L33、Act、Ubi、GAPDH、UK、CAC、TIP41这8个番茄候选内参基因的表达稳定性。结果表明,8个候选内参基因的平均CT值为26~34。综合3个软件的分析结果发现,在ABA诱导下,番茄中较稳定表达的内参基因为L33和Ubi;在MeJA诱导下,番茄中较稳定表达的内参基因为L33和EF1α;在SA诱导下,番茄中较稳定表达的内参基因为EF1α和L33。综上所述,L33基因是番茄在不同激素诱导下表达最稳定的候选内参基因。本研究筛选的最稳定内参基因将为后续番茄响应外源激素处理的差异基因表达分析和分子机制研究提供校准依据。
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利用实时荧光定量PCR和数字PCR检测鉴定水稻细菌性条斑病菌
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张健男,王依名,张洁净,陈磊,罗金燕,易建平,李斌,安千里
浙江大学学报(农业与生命科学版). 2023 (1): 55-64.
DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2021.12.271
白叶枯病和条斑病是水稻重要的细菌性病害。水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae, Xoo)和水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola, Xoc)属于同种下的2个致病变种。鉴别Xoo和Xoc对检疫和防控这2种病害至关重要。Xoo和Xoc中的铁-红酵母酸/铁-粪生素受体基因fhuE在进化过程中因不同程度地缺失而成为假基因。针对Xoc中有而Xoo中缺失的fhuE部分序列设计引物,筛选出Xoc特异引物XocFhuE-F(5-ATCGAACGATGTCACCAGGG-3)和XocFhuE-R(5-AGAAACGTGCGGCCAGATAA-3)。用XocFhuE-F/XocFhuE-R能只从Xoc菌株中仅扩增出159 bp片段,并结合荧光染料建立了SYBR Green实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qPCR)和EvaGreen微滴数字PCR(digital PCR, dPCR)方法来检测鉴定Xoc。在20 μL反应体系中加1 μL模板,qPCR检测菌悬液中Xoc的下限是1.6×104 CFU/mL,检测带菌种子中Xoc的下限是1.2×103 CFU/粒;dPCR检测菌悬液中Xoc的下限是1.6×103 CFU/mL,检测带菌种子中Xoc的下限是1.2×102 CFU/粒。综上所述,基于Xoc特异引物XocFhuE-F/XocFhuE-R建立的SYBR Green qPCR和EvaGreen dPCR为检疫Xoc和监测预警水稻条斑病提供了高效的检测方法。
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