围生期奶牛常处于能量负平衡状态，其身体功能的紊乱，会带来生理和代谢的双重应激，使奶牛处于疾病易感的状态，在环境不佳、饲养管理不当时，产后会诱发多类代谢性疾病和感染性疾病，严重威胁奶牛的健康和生产性能。因此，了解围生期奶牛产后易感疾病的原因并对疾病进行早期监测成为奶牛健康养殖的热点之一。本文从能量代谢、免疫功能、饲养管理及环境因素等多方面入手，阐述了围生期奶牛产后易感疾病的原因，并对血液、乳汁中常见病患的生物标志物及疾病早期监测的最新研究进展进行了综述。

为开发虾类来源的溶菌酶，本研究建立了利用巴斯德毕赤酵母表达系统高效分泌表达重组克氏原螯虾无脊椎动物型溶菌酶1（简称“pc-iLys1”）的方法。经密码子偏好性优化后的pc-iLys1 cDNA在毕赤酵母菌株SMD1168中成功地实现胞外分泌表达，重组蛋白分子质量约为17.1 kDa。在摇瓶中对诱导表达条件进行优化，获得的相对最佳表达条件为：培养基pH 7.0，培养温度28 ℃，甲醇体积分数1.5%，诱导表达时间96 h。采用该优化条件，进一步利用分批补料策略在5 L发酵罐中进行高密度培养诱导，120 h后获得重组pc-iLys1，其酶活性达到 2 052.6 U/mL，最终，酵母干细胞质量浓度达98.1 g/L。抑菌实验表明，重组pc-iLys1对多种革兰氏阳性和阴性细菌均具有明显的抑制活性。总之，本研究实现了克氏原螯虾i-型溶菌酶在毕赤酵母中的重组表达，为其大规模制备打下了基础。

通过研究蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制，为蜂王浆蛋白辅助治疗胃癌奠定实验基础。采用碱提酸沉法提取蜂王浆蛋白，并通过体外模拟消化实验得到蜂王浆蛋白体外消化产物，然后用不同质量浓度的蜂王浆蛋白体外消化物诱导体外培养的胃癌细胞SGC-7901，通过倒置显微镜观察其对胃癌细胞形态的影响，并通过集落形成实验检测诱导后胃癌细胞的集落形成能力；采用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测其对胃癌细胞增殖的抑制作用，通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡，并通过蛋白质印迹法检测其诱导后胃癌细胞中p53和PARP-1蛋白的表达情况。结果表明：蜂王浆蛋白体外消化产物使胃癌细胞形态发生皱缩，细胞密度降低，集落形成能力降低（P＜0.05），对胃癌细胞SGC-7901的增殖具有抑制作用。0.2 mg/mL体外消化产物经24 h和48 h培养后对胃癌细胞抑制率分别达到（57.58±3.48）%和（62.84±1.98）%（P＜0.05）。与空白对照组相比，蜂王浆蛋白体外消化产物对SGC-7901细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性，S期细胞减少，从而引起细胞凋亡；且经蜂王浆蛋白体外消化产物诱导后，胃癌细胞中p53蛋白表达量增加（P＜0.05），PARP-1蛋白表达量减少（P＜0.05）。说明蜂王浆蛋白体外消化产物能抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其发生凋亡，其机制可能与p53表达上调和PARP-1表达下调有关。

为探究不同单色光对桑黄生长及其抗氧化酶活性的影响，以白光（390～710 nm）为对照，采用半导体发光二极管（light emitting diode, LED）灯管为单色光光源，选择蓝光（455～490 nm）、绿光（515～540 nm）、黄光（580～600 nm）和红光（610～710 nm）4种单色光，分别对桑黄进行照射培养，观察桑黄的生长状况及形态特征，分析桑黄菌丝体超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和过氧化氢酶（catalase, CAT）活性及丙二醛（malondialdehyde, MDA）含量的变化。结果表明：与对照白光照射相比，在单色光红光照射下桑黄菌落直径显著增加，菌丝更加密集；在蓝光和绿光照射下，桑黄生长受到抑制；黄光照射对桑黄的生长影响较小。与白光照射相比，在第9天后，蓝光、绿光和黄光照射下桑黄菌丝体SOD活性显著增加（P＜0.05），而在第3天后，红光照射下菌丝体SOD活性显著降低（P＜0.05）。菌丝体CAT活性在蓝光、绿光、黄光和红光长时间照射下比在白光照射下有所增加，在第11天时，CAT活性显著增加（P＜0.05），尤其在黄光照射下达到(31.82±1.60） U/（g?min)。在蓝光照射第9天时，菌丝体MDA含量最高，达到（1.07±0.03） mmol/g，约为白光照射下1.16倍，而在其他单色光照射下MDA含量变化不显著。综上表明，不同单色光照射对桑黄生长及其抗氧化酶活性的影响不同，且红光照射更有利于桑黄生长。

以鲣鱼为原料，利用酶法制备鲣鱼黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase, XOD）抑制肽。在单因素试验的基础上，采用Box-Behnken响应面分析法，以水解度、氮回收率、XOD抑制活性、肌肽及鹅肌肽含量为响应值，对酶解工艺中蛋白酶种类、加酶量、酶解pH、温度和时间等影响因素进行优化，得到酶解的最优工艺：采用中性蛋白酶，加酶量为489.86 U/g，酶解pH为7.08，酶解温度为49.5 ℃，酶解时间为5 h。在此条件下，鲣鱼酶解产物的水解度为22.38%，氮回收率为83.31%，XOD抑制活性达到62.26%，肌肽和鹅肌肽含量分别为0.05%和2.45%（以干基计），与回归模型理论预测值基本一致。由本法所得的鲣鱼XOD抑制肽是以分子质量低于1 000 Da的寡肽为主。皮尔逊相关性分析表明，XOD抑制活性与肌肽或鹅肌肽含量无相关性，推测在酶解过程中产生了其他具有XOD抑制活性的小分子肽。

以内蒙古鄂托克前旗荒漠草原区家庭牧场为研究载体，以白刺+猪毛蒿群落、芨芨草+猪毛蒿群落及黑沙蒿+猪毛蒿群落为研究对象，设休牧1区（休牧与放牧时间均为7 d，RG1）、休牧2区（休牧与放牧时间均为14 d，RG2）、休牧3区（休牧与放牧时间均为21 d，RG3）和自由放牧区（连续放牧，CK）4个处理，分析在一个生长季内短期休牧对植被及土壤性质的影响。结果表明：1）各群落地上生物量均以RG3最高，除黑沙蒿+猪毛蒿群落中RG1与CK间差异不显著（P＞0.05），其他群落各处理间差异均显著（P＜0.05）。2）各群落中RG3的香农-维纳多样性指数均显著高于其他3个处理（P＜0.05）；均匀度指数在3种群落的各处理间差异均不显著（P＞0.05）；在白刺+猪毛蒿群落中RG3的丰富度指数显著高于RG1和CK（P＜0.05），但与RG2间差异不显著（P＞0.05），在芨芨草+猪毛蒿群落和黑沙蒿+猪毛蒿群落中RG3的丰富度指数均显著高于其他处理（P＜0.05）。3）在芨芨草+猪毛蒿群落中，受降水季节分配和植被根系分布深浅等因素影响，不同处理对土壤水分的影响规律不够明显。4）同一土层、不同处理的土壤有机质和全氮含量差异均显著（P＜0.01），其中RG3更有利于＞10～40 cm土层的有机质积累，全氮含量与多样性指数呈极显著相关（P＜0.01），与丰富度指数呈显著相关（P＜0.05），与均匀度指数呈负相关。综上，在4个处理中，RG3更符合荒漠草原区家庭牧场天然草地放牧管理实际，更有利于脆弱草地的生态系统恢复和可持续利用。

为研究猪毛蒿与其他物种之间的相互影响，该文分析了不同质量浓度（0.05、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/mL）猪毛蒿根水浸提液对蒙古冰草（Agropyron mongolicum）、扁穗冰草（Agropyron cristatum）、沙生冰草（Agropyron desertorum）、蒙农杂交冰草（A. cristatum×A. desertorum cv. ‘Hycrest-Mengnong’）4种冰草种子萌发和幼苗生长的化感作用。结果表明：1）不同质量浓度猪毛蒿根水浸提液能明显抑制蒙农杂交冰草种子萌发，而对其他3种冰草影响不显著（P＞0.05）。2）猪毛蒿根水浸提液对4种冰草幼苗生长具有“低促高抑”效应，但大部分与对照相比差异不显著（P＞0.05）。3）猪毛蒿根水浸提液对4种冰草种子萌发和幼苗生长的化感作用综合效应的强度依次为：蒙农杂交冰草＞蒙古冰草＞扁穗冰草＞沙生冰草，其中对蒙古冰草产生明显的促进作用（P＜0.05），在0.5、1.0、5.0 mg/mL质量浓度处理下对蒙农杂交冰草产生明显的抑制作用（P＜0.05），说明这2种冰草对猪毛蒿根水浸提液具有更强的敏感性。本研究结果可为荒漠生态系统群落组建和植被恢复提供理论依据。

为了解长江上游低山丘陵区典型人工植被系统下土壤动物群落结构特征，于2015年10月选取马尾松（Pinus massoniana,PM）、大桉（Eucalyptus grandis,EG）、红椿（Toona ciliata, TC）、硬头黄竹（Bambusa rigida,BR）人工植被系统为研究对象，以毗邻农耕地（farm land, FL）为对照，采用干、湿漏斗法对中小型土壤动物群落结构进行调查。结果显示：实验共采集到土壤动物4 444只，隶属于5门12纲22目83类。各样地间土壤动物的平均密度差异达极显著水平（F=78.478，P=0.000），类群数差异达显著水平（F=4.810，P=0.020）。各样地土壤动物类群数垂直分布均随土层加深而逐步减少，呈现表聚性特征。植食性、杂食性和捕食性土壤动物在BR样地中所占比例最高，腐食性土壤动物在FL样地中所占比例最高。在BR样地中土壤动物的多样性指数、均匀度指数、丰富度指数和密度-类群指数均表现为最高，优势度指数在FL样地中最高，除密度-类群指数（F=2.702，P=0.092）外，其余各指数差异均达到极显著水平（P＜0.01）。各林地与FL的相似性为中等不相似（除EG外）；各人工植被系统间的相似性为中等相似（除FL外）。综上表明，不同植被生态系统土壤动物群落结构有明显差异，其中竹林生态系统具有更高的土壤动物多样性。

为研究精胺对鹅免疫器官指数及免疫相关因子基因表达的影响，用5和10 mg/kg精胺灌喂成年四川白鹅雌鹅，测定其肝指数、胸腺指数、脾指数和法氏囊指数，检测在各免疫器官组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ基因表达量和多胺含量；对照组灌喂禽用生理盐水。结果表明：10 mg/kg精胺灌喂组的鹅肝指数显著低于对照组（P＜0.05）；5 mg/kg精胺灌喂组的鹅胸腺和法氏囊中TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ表达量均显著低于对照组（P＜0.05）；10 mg/kg精胺灌喂组的鹅法氏囊中TNF-α和IFN-γ及肝中IFN-γ表达量均显著低于对照组（P＜0.05）；外源性精胺显著下调脾中IFN-γ表达量（P＜0.05）；精胺灌喂组的鹅肝内精胺含量显著高于对照组（P＜0.05）。说明精胺可通过介导鹅免疫相关因子基因表达来参与调控鹅免疫功能，并且存在剂量依赖性和组织特异性。

为深入研究鸡G蛋白α亚基（G-protein alpha subunit, GNAS）基因的转录剪接情况，采用5′和3′cDNA末端快速扩增（rapid-amplification cDNA ends, RACE ）技术，对鸡GNAS基因进行克隆测序；并采用定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）技术，检测鸡皮肤、胸肌、心、脑、肝、肺和腹脂等7种组织中GNAS基因剪接体的表达量。结果表明：鸡GNAS基因存在1 554和1 796 bp 2种转录剪接体，均含12个外显子，二者仅第1外显子的长度和位置不同，其余第2－12外显子相同。克隆子1（1 554 bp）编码417个氨基酸，克隆子2（1 796 bp）编码379个氨基酸。在NCBI数据库中进行蛋白比对发现，克隆子2的氨基酸序列与已知的人和小鼠的GNAS基因Gαs亚基同源相似度达93%，而克隆子1的氨基酸序列与XLαs亚基的同源性较高（相似度87%）。表达量检测表明，2种转录剪接体在7种组织中均有不同程度的表达，其中：在脑组织中的表达量最高，与其他组织间差异极显著（P＜0.01），在皮肤组织中的表达量（P＜0.01或P＜0.05）次之；而在肺、胸肌、肝、心、腹脂等组织中的表达量较低。

为探究新型复合益生菌对热应激奶牛生产性能、瘤胃发酵特征和血清抗应激指标的影响，选取45头泌乳后期荷斯坦奶牛，分为3组，其中：对照组饲喂全混合日粮，复合益生菌组和酵母培养物组分别在对照组日粮基础上添加复合益生菌20 g/（d·头）和酵母培养物100 g/（d·头）。结果显示：日粮添加复合益生菌和酵母培养物显著提高了热应激奶牛产奶量（P=0.03），但对乳成分没有影响；且提高了瘤胃液氨态氮和微生物蛋白浓度（P=0.04），但对挥发酸产量没有影响。复合益生菌和酵母培养物显著提高了热应激奶牛粗蛋白和中性洗涤纤维的表观消化率（P＜0.05），且复合益生菌的提升效果优于酵母培养物。此外，复合益生菌和酵母培养物显著提高了热应激奶牛血液中三碘甲腺原氨酸浓度（P＜0.01）。因此，在基础日粮中添加复合益生菌能够缓解热应激对奶牛生产性能的影响，并且效果显著优于酵母培养物。

构建人叉头转录因子O亚型6（forkhead box class O6, FOXO6）基因的真核表达载体，并探究FOXO6对胶质瘤细胞存活的影响。以人神经胶质瘤细胞U251的cDNA为模板，利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）方法扩增FOXO6基因片段，并将其与pRK5-myc载体连接，构建pRK5-myc-FOXO6重组质粒；将构建成功的重组质粒和空载体分别转染至U251细胞中进行表达，通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（4’, 6-diamidino-2-phenylindole, DAPI）染色法分别检测FOXO6对U251细胞中转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α）转录水平的影响及其对U251细胞存活的影响。经双酶切鉴定及DNA测序表明：pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功；FOXO6转染组中的PGC-1α转录水平出现了明显的下降，并出现了明显的细胞凋亡现象。上述结果显示，pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功，体外实验暗示FOXO6可能通过抑制PGC-1α的表达来抑制U251细胞的能量代谢及抗氧化过程，进而诱导U251细胞的凋亡，这为后续深入研究FOXO6在胶质瘤上的作用机制和靶点奠定了基础。

通过设立空白组、对照组、表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate, EGCG）处理组，探究EGCG对葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium, DSS）诱导小鼠炎症性肠病的影响。结果发现，EGCG处理组的小鼠脾明显比对照组小，并且EGCG能够降低小鼠肠道固有层细胞和肠道组织上清液中白介素-6（interleukin-6, IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）的表达及分泌（P＜0.01），而对IL-10的表达与分泌无明显作用 （P＞0.05）。EGCG对小鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1、occludin的表达无显著影响，小鼠肠道苏木精-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色结果也显示肠道黏膜和上皮屏障损伤无明显变化。综上所述，EGCG能够抑制炎症因子分泌，减少由肠道炎症引起的小鼠全身性炎症反应，对DSS诱导的小鼠炎症性肠病起到一定的保护作用。

对2015年浙江省某鸡场疑似心包积液-肝炎综合征的患病鸡进行病原检测和分离鉴定，并对分离到的禽腺病毒全基因组进行遗传进化分析。采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）扩增结合核酸测序分析确定其病原为血清4型禽腺病毒（FAdV4）；通过鸡胚接种和原代鸡胚肾（chicken embryo kidney, CEK）细胞多次传代培养，获得FAdV4细胞适应毒株ZJ2015。血凝实验显示：ZJ2015株不能凝集小鼠、大鼠、鸡和绵羊的红细胞，间接免疫荧光分析表明其半数组织培养感染剂量（50% tissue culture infective dose, TCID₅₀)为2.0×10⁶ mL^－1。以 0.2 mL/枚剂量接种鸡胚，该毒株能100%致死鸡胚，且致死鸡胚胚体潮红、肝肿大、出血等。将FAdV4全基因组分11段分别进行PCR扩增和测序，获得跨越ZJ2015毒株的全基因组序列（GenBank登录号：MF521611.1），对其全基因组、hexon和fiber-2基因的氨基酸进行遗传进化分析显示：ZJ2015毒株与近几年国内流行的FAdV4强毒株处于同一个分支上，同源性达到99.87%以上；与ON1、KR5、MX-SHP95等较早毒株相比，ZJ2015具有1 966 bp的大段缺失及Fiber-2蛋白上多个位点的突变。浙江毒株ZJ2015的分离可为进一步开展FAdV4的诊断防控技术和毒力变异机制的研究奠定基础。