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浙江大学学报(农业与生命科学版). 2015 (6): 623-740.
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BmNPV orf98对家蚕核型多角体杆状病毒复制、转录及包装的影响
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史利利,蒋彩英,于威,陈琛,蒋磊,巩成见,童富淡
浙江大学学报(农业与生命科学版). 2015 (6): 623-630.
DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2015.01.19
为了研究家蚕核型多角体病毒(Bombyxmori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)基因orf98 的功能,通过λRed重组系统定点敲除BmNPVorf98 基因,构建缺失型重组病毒Bm98-ko-Bacmid;以Bac-to-Bac系统补回BmNPVorf98 基因,构建补回型重组病毒Bm98-re-Bacmid;将野生型病毒(wtBacmid)、缺失型病毒(Bm98-ko-Bacmid)和补回型病毒(Bm98-re-Bacmid)分别转染家蚕细胞BmN.病毒滴度检测结果显示,Bm98-ko-Bacmid可形成侵染性的病毒粒子,但数量显著降低(P<0.05).透射电子显微镜观察发现,Bm98-ko-Bacmid只产生游离的杆状病毒粒子,数量明显减少,而wtBacmid和Bm98-re-Bacmid产生大量具有囊膜结构的成熟病毒粒子.荧光定量聚合酶链反应分析结果表明,BmNPVorf98 基因缺失对BmNPV病毒复制没有影响,而早期基因lef3、晚期基因vp39 和极晚期基因p10 的转录水平显著降低(P<0.05).综上所述,BmNPVorf98 基因对病毒复制是非必需的,但显著影响病毒的繁殖速度和包装(P<0.05);对病毒各个时期的基因转录也具有重要影响.
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内参基因对TYR、MITF和ASIP基因在白绒乌骨鸡各组织表达水平的影响
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郑嫩珠, 李丽, 辛清武, 缪中纬, 朱志明, 刘凤辉, 吴俭飞, 卢立志
浙江大学学报(农业与生命科学版). 2015 (6): 732-740.
DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2015.04.131
以健康白绒乌骨鸡肌肉、肾、肝、肌胃和皮肤为试验素材,应用实时荧光定量聚合酶链反应技术探讨β-肌动蛋白(beta-actin,ACTB)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和18S核糖体RNA(18S ribosomal RNA, 18S rRNA)3个内参基因的组织表达稳定性及其对酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)、小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)和刺鼠信号蛋白(agouti signaling protein,ASIP)等目的基因在白绒乌骨鸡各组织表达水平的影响,并采用紫外分光光度法分析各组织黑色素沉积规律,从中筛选出理想的内参基因。geNorm和NormFinder软件分析结果显示,内参基因GAPDH在白绒乌骨鸡各组织表达稳定性最高,ACTB表达稳定性最低。相对定量和黑色素沉积结果表明,GAPDH作为内参基因时,各组织MITF、TYR基因的相对表达量与黑色素沉积规律基本一致,表现为皮肤>肾>肌胃>肝>肌肉;ASIP基因的相对表达量与黑色素沉积规律正好相反,表现为肌肉>肝>肌胃>肾>皮肤,这与各目的基因对黑色素沉积的调控功能相符,即MITF和TYR基因高表达有利于黑色素沉积,ASIP基因高表达则抑制黑色素沉积。而18S rRNA和ACTB作为内参基因时,各目的基因表达量未表现出上述规律,与其各自对黑色素沉积的调控功能不相吻合,没有达到理想的校正效果。表明GAPDH基因稳定性最好,且能真正体现目的基因对黑色素沉积的表达调控,是校正目的基因在白绒乌骨鸡不同组织中mRNA表达量的最优内参基因。
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