为能快速经济地获取小干扰核糖核酸 (small interfering RNA siRNA)，设计采用特异性延伸引 物和上游、下游两条通用引物，通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6 +1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子小发夹状RNA（shRNA）表达框.用该方法制备的增 强型绿色荧光蛋白（EGFP）特异性三种启动子shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因 表达，其中以tRNAValshRNA表达框抑制效果最显著，且未检测到干扰素应答基因2'5'OAS mRNA的表达， 表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应，进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最 适搭配启动子.
国家自然科学基金资助项目(30371270);浙江省卫生厅重点资助项目(2002ZD007);浙江省科技 厅重大资助项目(2003C13015).
倪勤 刘克洲 羊正纲 姚航平 陈智. 三种启动子shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用[J]. J4, 2005, 39(7): 1086-1090.
NI Qi, LIU Ke-Zhou, YANG Zheng-Gang, TAO Hang-Beng, CHEN Zhi. . J4, 2005, 39(7): 1086-1090.
http://www.zjujournals.com/xueshu/eng/CN/ 或 http://www.zjujournals.com/xueshu/eng/CN/Y2005/V39/I7/1086
Cited
