球毛壳菌是一种非常重要的生防真菌.为了从分子生物学水平研究球毛壳菌与立枯丝核菌的拮抗机制,选用GFP(green fluorescent protein)作为报告基因对球毛壳菌进行标记.通过构建和转化EGFP(Enhanced GFP)表达载体,得到氯嘧磺隆抗性的转化子.经过几轮验证筛选,包括选择性平板筛选、PCR扩增目的片段验证、Southern杂交、荧光镜检等,确认SUR基因和EGFP基因已经插入球毛壳菌的基因组并在其中表达标记.取一个确认为荧光标记转化子的菌株,进行生防特性分析.主要通过与病原真菌平板共培养、载玻片对峙培养等方法初步研究了球毛壳菌与立枯丝核菌的拮抗机理.结果发现,在对立枯丝核菌的抑制过程中,球毛壳菌的拮抗机理主要是重寄生作用.

为研究柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)ptp-2基因特性,根据ApNPV PstⅠ-C片段核酸序列,设计引物克隆了ApNPV ptp-2基因;将ptp-2基因亚克隆至原核表达载体pQE-30,构建重组质粒pQE-ptp-2,并在大肠杆菌M15中进行诱导表达,表达量达菌体总蛋白的38.7%,经His标签杂交鉴定证明表达产物为His融合蛋白.以原核表达的His-PTP-2蛋白作为抗原,制作兔多克隆抗血清,Western blot分析表明:PTP-2蛋白不参与ApNPV包涵体的结构组成.

亚洲玉米螟幼虫血细胞包囊具双相性.当DEAE-sephadex珠子被诱导进亚洲玉米螟幼虫的血腔内后,颗粒细胞首先在3 min内吸附到珠子表面,浆细胞随后吸附形成多层浆细胞层,注射48 h后最终形成重叠细胞层的平滑囊鞘.完整的囊鞘显示有3层明显不同的区域.颗粒细胞起着最初识别血腔中的外源体作用,一旦珠子被颗粒细胞识别为外源体,颗粒细胞将裂解释放一些公认的物质诱导浆细胞识别外源体,于是包囊被立刻启动.总之,研究结果显示亚洲玉米螟幼虫包囊明显依赖血细胞之间的互相合作.

为探讨无载体主干序列(细菌DNA)的表达框基因直接转化栽培小麦的可行性和有效性,对栽培小麦(Triticum aestivum L.)进行了bar表达框基因的基因枪转化.通过试材培养、外植体分离、bar表达框基因分离提取和纯化、基因枪轰击、诱导分化与再生培养、再生苗核酸抽提、转基因检测及除草剂涂抹试验等方法,筛选到23株全部来自幼胚愈伤的独立再生苗,其中18株显示bar表达框基因的整合,且均表现抗除草剂效应.基因型鄂麦12号的转化频率(1.55%)高于鄂恩1号(0.87%),两基因型在1100 psi轰击压下的转化频率均高于900 psi,其中鄂麦12号达到3.51%,明显优于鄂恩1号,且高于常规小麦基因枪的平均转化频率0.50%～1.00%.鄂麦12号幼胚在1100 psi轰击压下转化bar表达框基因可获高转化效应.表明受体基因型、外植体类型、轰击压等因素在优化表达框基因转化体系中具重要作用.推断表达框基因转化方法具有片段小、环境安全、转化效率高、整合模式简单、表达高效等优势,在作物遗传转化中具有广泛应用前景.

参考Genebank上收录的PUR46-MAD株(NC-002306)、TS株(DQ201447)和Purdue-115株(Z34093)核苷酸序列,设计并合成16对引物,应用RT-PCR技术成功地分16个片段扩增了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SC-Y株全长基因组序列,将这16个基因片段克隆,并测定其核苷酸序列.应用生物软件BioEdit对各测序结果进行序列拼接,确认SC-Y株基因组全长cDNA 28590 bp(GenBank收录号DQ443743),共包含7个开放阅读框.基因组5'端非编码区长315 nt,3'端非编码区长277 nt.与Miller M60株、Miller M6株和TS株相比,SC-Y株S基因缺失6个碱基.通过构建结构蛋白基因(S、sM、M和N)系统进化树,结果表明,SC-Y株可能与美国Purdue株来源于共同的祖先病毒.密码子偏爱性分析结果认为猪传染性胃肠炎病毒对以T和A结尾的密码子表现轻微的偏爱性,病毒基因表达选择酵母等真核系统可能更为合适.

针对酵母细胞破壁困难和酸碱不可溶性β-D-葡聚糖水解不彻底的问题,首先利用涡流微珠破壁法对酵母细胞进行破壁,使酵母细胞破壁率达到95.28%;其次采用高浓度酸预处理酸水解方法使酵母β-D-葡聚糖的酸解回收率高达98.76%;最后,由GOPOD法测定出酵母β-D-葡聚糖的含量.在此基础上建立了一个新的酵母β-D-葡聚糖的测定方法,新方法的相对标准差(RSD)和平均加样回收率分别为0.46%和99.96%.

探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠脑缺血的修复和治疗.体外分离培养大鼠MSCs,以Hoeschst33342标记,移植到大脑中动脉梗塞(MCAO)模型的大鼠体内,分别设立缺血1 d和缺血7 dMSCs移植组与缺血对照组,对各组大鼠进行神经功能损害严重程度评分(NSS)及大脑组织切片观察比较.结果发现,缺血1 d MSCs移植组大鼠NSS评分低于另外两组,差异显著(P＜0.05),大脑组织结构清晰、完整,胶质瘢痕少;缺血7 d MSCs移植组与对照组无明显差异(P＞0.05).故缺血早期进行MSCs移植,大鼠神经功能恢复情况明显.MSCs在损伤后的脑组织内能够存活并且分化为神经元、胶质细胞等,对动物神经损伤后组织重建及功能恢复有一定的治疗作用.

应用响应曲面模型(RSM)方法研究不同温度、pH值、NaCl浓度对生孢梭菌孢子生长的影响.不同试验条件下生孢梭菌孢子的生长曲线应用Baranyi生长模型进行拟合,生长曲线参数生长率(GR)和迟滞期(LT)应用RSM方法建立生孢梭菌孢子的生长预测方程.从另外随机选择试验组合对建立的方程进行验证,并通过计算预测标准差(SEP)、平方根误差(RMSE)、准确性因子(Af)和偏差因子(Bf)对建立的生长预测方程进行数学检验.结果表明,温度、pH值和NaCl浓度对生孢梭菌孢子生长影响显著,应用RSM方法建立的生长预测方程能够较好的模拟生孢梭菌孢子在不同试验条件下的生长状况,对食品中蛋白水解型肉毒梭菌的生长和控制具有参考意义.

以我国海洋养殖的主要贻贝品种之一厚壳贻贝为材料,通过大鼠棉球肉芽肿和佐剂诱导的关节炎模型研究厚壳贻贝脂溶性提取物的抗炎生物活性.结果表明厚壳贻贝脂溶性提取物具有很强的抗炎生物活性,能显著抑制大鼠棉球肉芽肿和大鼠佐剂性关节炎原发性和继发性症状,其抗炎生物活性比新西兰绿唇贻贝脂溶性提取物稍低或与之相当.这为进一步把贻贝作为具有抗炎保健功能的食品或具有自主知识产权的纯天然安全有效的新型抗炎药物开发利用提供了理论基础和依据.

以粳稻品种秋光为材料,利用不同压力处理不同浸种时间的水稻种子,研究了处理后水稻种子细胞膜透性和萌发过程中淀粉酶活性的变化,并分析了它们与发芽势和发芽率的相关性.结果表明:高压处理后,种子发芽势和发芽率随处理压力的升高而降低,种子细胞膜透性随处理压力的增大而增加,且不同浸种时间之间也存在显著性差异;种子在萌发过程中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性随处理压力的增加而显著降低;高压处理后种子的发芽势和发芽率与细胞膜透性的增加百分率呈显著负相关,而与α-淀粉酶和β-淀粉酶活性均存在极显著的正相关,表明高压处理使种子的发芽势和发芽率降低与细胞膜透性的增加及淀粉酶活性降低有关.

开展以20～100 Gy 60Co-γ射线辐照处理丰香、章姬两品种试管苗辐射诱变育种试验.试验结果表明各处理对草莓植株的生长和发育均有影响,但不同品种对60Co-γ辐射敏感性不同,半致死剂量也不同,丰香半致死剂量约为55 Gy,章姬的半致死剂量约为64.4 Gy;60Co-γ辐射对丰香品种有明显的抑制作用,主要表现在植株变矮,开花延迟,花朵数减少,且随着剂量增大,这种趋势更加明显;不同60Co-γ辐射处理对章姬开花影响较对生长影响更为明显,单从较高变异率和优变情况来看,20 Gy处理变异率最高,达到36.53%,且优变多,是章姬品种60Co-γ辐射育种的较适宜剂量.

研究了3种水分模式(干旱交替型,浅水层连续灌溉型和控水模式)及分次施氮条件下,施氮对水稻根际土壤微生物生态效应的影响,结果表明:水稻根际土壤微生物生态效应,不仅仅受到水分条件和施氮的影响,还受到水分条件和施氮的交叉影响.氮素因子一般在水稻生长的分蘖期就对水稻根际土壤微生物生态效应有显著影响,到孕穗期,水分条件开始起作用,在成熟后期,水稻不仅受到水分条件和施氮的影响,同时还受到水分条件和施氮的交叉作用影响.这说明在分次施氮的施肥模式下,施氮对水稻根际土壤微生物的生态效应保持一定的持续作用,而水分条件对土壤微生物的生态效应也需要一定的时间才能起作用.同时在水稻生长周期内的各个时期,水稻根际土壤微生物生物量碳与根际土壤酶等变化并不完全一致.

从感染根结线虫的番茄根系中分离到46个细菌菌株,NA平板初筛获得13个抑制青枯雷尔氏菌生长的拮抗菌株,其抑菌圈宽度达7.1～26.3 mm.温室试验表明,菌株EN5、EN15、EN01和EN16对青枯病的防治效果最为显著,平均防效分别为70.82%、89.54%、85.38%和78.81%;而EN5、SW1和SB2能有效减少番茄根结线虫病的根结指数,防效均达49%.同时测定这些菌株对青枯病菌-根结线虫复合病的防治效果,结果表明,EN5、SW1和SB2均能显著降低病情指数,其中SW1的防效最佳,青枯病指数比对照下降56.66,根结指数降低5.21.通过形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鉴定菌株EN5、SW1和SB2为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtili).

利用液-酵法生产的球孢白僵菌悬乳剂于2003年4～5月在浙江省余杭进行笋竹蚜虫的田间药效试验和农户示范,以3种不同浓度稀释液(含孢量分别为1×107、1×106、1×105 个·mL-1)进行常规喷雾处理,并设清水对照及1000倍10%吡虫啉稀释液为阳性对照.结果表明,定株竹冠喷雾7 d后,3个浓度处理的相对防效分别为60.0%,75.1%和80.7%,防治效果随浓度增加而提高.用1000倍白僵菌稀释液(含孢量1×107个·mL-1)进行小区防治试验,对竹蚜的防效可达90.8%;在农户示范大田试验中,7 d内对竹蚜的相对防效可达87.9%,防治效果接近10%吡虫啉的1000倍稀释液处理.表明白僵菌对竹蚜有较好的防治效果.

为了解植物生长促生细菌CH1与CH2对黄瓜生长及品质的作用机制,采用种子催芽、温室盆栽与生理生化的方法,研究了其对黄瓜生长及生理代谢的影响.结果表明,CH1与CH2对黄瓜种子萌发、根与植株的生长有显著促进作用,根部与叶部中超氧阴离子产生速率、H2O2和丙二醛(MDA)含量显著减少,与品质相关的叶绿素、蛋白质、可溶性糖和VC含量显著增加.

运用电磁感应仪EM38,结合GIS技术和地统计方法对黄河三角洲地区典型地块0～40 cm与0～80 cm土层含盐量的空间变异性进行研究,并对研究区盐渍化分级以及盐分剖面分布特征进行探讨.结果表明:研究区各土层土壤盐分较高,均表现为中等变异强度,且研究区土壤盐分总体上呈一定的表聚趋势;各土层土壤盐分的半方差函数均较符合指数模型,都表现为强空间自相关性;气候、微地形、地下水等结构性因素是主导土壤盐分空间分布格局的直接因素.由盐渍化分级及盐分剖面特征分析结果可知:重度盐化土是研究区最主要的土壤类型,轻度盐化土分布面积最小;研究区主要盐分剖面类型为表聚性,其次分别为均匀型和底聚型;此外,盐分剖面类型的分布在一定程度上反映了植被类型以及土地利用方式.该研究结果为黄河三角洲地区盐渍化土壤的精准改良与科学管理提供了一定的理论基础和实践依据.

为加强农业机械化发展的宏观管理,在分析现有农业机械化水平评价方法基础上,根据浙江省农业机械化发展现状,建立了浙江省农业机械化水平评价指标体系,同时结合有关文献确定了浙江省农业机械化水平评价标准,并采用专家调查法确定了各评价指标的权重.最后,利用1993-2003年有关农业机械化统计数据测算出历年浙江省农业机械化水平,评价结果与实际情况基本一致,为指导浙江省农业机械化发展提供了科学依据.

针对区域土地资源生态安全的特点,基于P-S-R模型和层次分析法建立了土地资源生态安全评价的指标体系,采用物元和可拓理论构建了区域土地资源生态安全评价的综合评判模型,并以宁夏南部彭阳县为例进行了实证研究.研究结果表明:①研究区域1986年-2004年近20年以来土地资源生态安全状态有改善的趋势,但是整体水平并不容乐观,目前仍处于临界安全水平.②评价结果符合当地实际情况,物元模型克服了评价过程中人为因素的影响,通过对参评因子的量化处理,实现了评价精度的提高,应用物元模型进行土地资源生态安全评价可行、客观,可作为土地资源生态安全评价的一种新方法.③物元模型作为正在蓬勃发展的数学工具,无论在理论体系方面还是在实际应用中都存在着不完善的地方,例如目前可供选择的关联度函数较少,因此物元模型在土地资源生态安全评价中的应用也需要进一步深入研究和扩展.

强的松生产废水是一种难处理工业废水.混合强的松废水的平均BOD5/COD为0.23,沉淀去除不溶性COD,BOD5/COD可提高到0.34.混合强的松废水的COD:N:P为10415:10:1,在厌氧处理中,需外加氮磷营养源.试验证明,采用上流式厌氧污泥床(UASB)工艺处理高浓度强的松废水是可行的.在HRT为2 d、容积COD负荷为4.16～4.98 g·L·d-1的条件下,COD去除率可达80%以上.当容积COD负荷超过5.96 g·L·d-1时,反应器易发生酸化,但可通过降低容积COD负荷和调节进水碱度的方法解除酸抑制,使反应器效能得到恢复.