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浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大学学报(农业与生命科学版)  2006, Vol. 32 Issue (3): 237-244    
论文     
减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究
迪卡　 陈雪燕　 帅江冰　 陈宁　 方维焕　
迪卡（浙江大学,动物预防医学研究所,浙江省动物预防医学重点实验室,浙江,杭州,310029）　　　　　　
陈雪燕（浙江大学,动物预防医学研究所,浙江省动物预防医学重点实验室,浙江,杭州,310029）　　　　　　
帅江冰（浙江大学,动物预防医学研究所,浙江省动物预防医学重点实验室,浙江,杭州,310029）　　　　　　
陈宁（浙江大学,动物预防医学研究所,浙江省动物预防医学重点实验室,浙江,杭州,310029）　　　　　　
方维焕（浙江大学,动物预防医学研究所,浙江省动物预防医学重点实验室,浙江,杭州,310029）　
 全文: PDF(594 KB)  
摘要： 本研究以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,探讨了减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的可行性.通过多功能分光光度仪测定细菌的OD600和eGFP在大肠杆菌和减毒沙门氏菌中的表达量,结果表明:eGFP在沙门氏菌中的表达量依赖于IPTG的浓度,最佳浓度为0.5 mmol·L-1,增加浓度至0.75 mmol·L-1不能增加eGFP的表达量;而该现象在大肠杆菌中不明显.当IPTG浓度等于或大于0.5 mmol·L-1时,沙门氏菌中eGFP的表达量显著高于大肠杆菌.若以相对荧光度(1个OD600单位的荧光值,即eGFP相对表达量)表示,两种宿主菌的最佳诱导时间均为3 h.Hela细胞侵袭力试验表明该减毒沙门氏菌仍具有侵袭力,同时以脂质体转染为对照,将携带重组质粒pcDNA3-eGFP的减毒沙门氏菌转染Hela细胞,48 h后可观察到绿色荧光,表明了该菌可作为载体将重组质粒携带到细胞内,并使外源基因得到表达.此外,利用基于微孔板的多功能分光光度仪可直接检测荧光强度和OD值,能快速、准确地进行多样本检测,可用于GFP在不同宿主菌或相同宿主菌在不同试验条件下,甚至不同表达载体在相同宿主菌中表达等方面的研究.
出版日期: 2006-05-27
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迪卡　 陈雪燕　 帅江冰　 陈宁　 方维焕　. 减毒沙门氏菌作为原核表达宿主菌和真核表达载体的研究[J]. 浙江大学学报(农业与生命科学版), 2006, 32(3): 237-244.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/agr/CN/Y2006/V32/I3/237

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