鹅α干扰素基因在COS-7细胞中的瞬时表达及抗病毒功能初探
为了研究鹅α 干扰素( goIFN‐α) 基因的特性和功能,将天府肉鹅的α 干扰素基因克隆到pcDNA3 .1( + )真核表达载体上,构建重组质粒pcDNA3 .1‐goIFN‐α ,脂质体介导将其转入COS‐7 细胞中;应用间接免疫荧光、酶联免疫吸附测定( enzyme‐linked immunosorbent assay ,ELISA) 和免疫印迹(Western‐blot)法检测goI FN‐α 基因在COS‐7 细胞中的转录和表达情况,并对COS‐7 细胞表达上清液进行抗病毒活性检测.结果表明:目的蛋白在转染12 h 后就可以被检测出,36 h 前目的蛋白在上清液中快速增加,之后增加速度变慢;重组质粒能够在COS‐7 细胞内得到高效表达,表达的蛋白分子质量为38ku ,比预测的分子质量(约21 ku)大;间接免疫荧光显示,细胞内出现黄绿色荧光,胞核附近最亮;表达产物经细胞病变抑制法测定,显示出具有明显的抗猪水泡性口炎病毒(VSV)及小鹅瘟病毒(GPV)的活性.