抗麦草畏多克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立
为建立麦草畏的免疫分析方法,采用碳化二亚胺法将麦草畏(DIC)与卵清蛋白(OVA)和牛血清蛋白(BSA)偶联,分别合成免疫原与包被原;用合成的免疫原免疫新西兰大白兔获得抗麦草畏多克隆抗体,该抗体效价为1∶1.28×105,且该抗体与麦草畏的结构类似物2,3,5-三氯苯甲酸、2,3,6-三氯苯甲酸、2-氨基-3,5-二氯苯甲酸的交叉反应率均小于0.1%。以包被原1∶8000和多抗溶液1∶80000的稀释倍数为工作浓度,建立麦草畏间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法,此方法检测麦草畏的线性范围为1~100 ng·mL-1,线性回归方程为y=86844 ln x+15.001,R2=0.9944,最低检测限为IC20=1.779 ng·mL-1;玉米粉和面粉空白样品的麦草畏添加回收实验表明,麦草畏添加值为5~30 μg·kg-1时,玉米粉中的麦草畏回收率为53.08%~92.37%,面粉的回收率则分别为66.5%~94.63%。