细胞组学是基于单细胞分析的科学,能在生命活动最小单位的活细胞水平,反映细胞在外环境调控下,与细胞动力学和组织功能相关的基因组学、蛋白组学,旨在测定单细胞的分子表型.结合数据模式分析,通过特定的模拟临床疾病细胞模型图像分析、流式细胞术等高内涵筛选,提供复杂疾病治疗相关的生物信息.通过分析正常与病理情况下基因、蛋白和分子信号通路的差异起源,经过整合与相互关联、相互作用的基因、蛋白和多重代谢反应的网络系统研究,可发现假设的药物作用的靶点,并预测临床可能遇到的不良反应.利用上述概念构建的"工作模型",与先进的测试手段和信息工具综合而成的细胞组学,可望给药理毒理学研究带来新机遇.

目的:采用淫羊藿素(icaritin,ICT)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养微环境,论证ICT提高ES细胞体外定向分化为神经细胞的效应.方法:采用拟胚体培养法,评价ICT对ES细胞体外定向分化为神经细胞的诱导作用;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定神经细胞特异基因和蛋白表达谱.结果:ICT在10-7mol/L浓度时,对ES细胞定向分化为神经细胞表型呈现最佳诱导效应,在分化d 8+8时,分化率高达80%(P＜0.001),并呈良好的量效和时效关系.分化神经表型者表达神经元特异性微管蛋白(β-tubulinⅢ)基因和神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因,同时伴有神经前体细胞特异性标志蛋白(nestin)及β-tubulinⅢ和GFAP特异性蛋白阳性表达.结论:应用拟胚体培养微环境调控法,ICT可诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,并与神经发育依赖性特异基因和蛋白表达呈正相关.

目的:探索淫羊藿素(icaritin,ICT)对Aβ25-35肽致大鼠原代培养神经细胞的损伤保护作用及潜在机制.方法:制备d 17胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,支持培养7 d后,与ICT预孵育24 h并加入Aβ25-35肽,作用72 h后以细胞形态、MTT值、培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平作为细胞的损伤指标;并以线粒体膜电位(△ψm)改变作为凋亡早期指标,AO/EB染色差异作为凋亡后期指标.结果:0.1μmol·L-1ICT预孵育24 h能显著改善10μmol·L-1Aβ25-35肽所致的原代培养神经细胞的损伤,MTT、LDH及形态学结果显示:ICT能提高Aβ25-35肽损伤神经细胞的存活率,JC-1染色结果显示:ICT能防止Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体△ψm下降,AO/EB染色结果显示:ICT能够改善神经细胞凋亡.结论:ICT经抗凋亡机制对Aβ25-35肽损伤大鼠原代培养神经细胞发挥保护作用.该作用与ICT干预Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体膜电位下降和核损伤有关.

目的:评价微粒体Ⅱ相代谢酶基因在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)定向分化肝细胞中的表达,为进一步探索酶蛋白表达及其催化活性提供依据.方法:ES细胞体外悬滴培养定向分化成肝细胞表型,RT-PCR法检测肝细胞发育依赖性基因AFP、ALB、CYP7a1的表达,免疫细胞化学法确认成熟肝细胞特异性标记物白蛋白(ALB)表达,RT-PCR法检测上述肝细胞中Ⅱ相代谢酶尿苷二磷酸葡萄糖醛酸结合酶系(UGTs)和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)基因表达.结果:ES细胞在定向分化至d 8时,肝细胞发育依赖性基因AFP和ALB有较高表达,d 18时AFP表达甚微而ALB表达显著增加,并伴有成熟肝细胞特异性基因CYP7a1的表达.定向分化呈肝细胞表型时,成熟肝细胞特异性蛋白ALB呈强阳性表达.分化过程中Ⅱ相代谢酶基因UGT1a1、UGT1a9在分化前后均稳定表达;UGT1a6表达呈发育依赖性;UGT2b5未见表达;mGST1在分化前后均有少量表达,但在成熟肝细胞中表达显著增加,与成熟小鼠肝相似.结论:ES细胞体外悬滴培养可定向分化为成熟肝细胞;Ⅱ相代谢酶UGTs、mGST1基因在分化成熟肝细胞表达与小鼠肝细胞相似,可望为Ⅱ相代谢酶代谢深层次研究提供高效模型.

目的:基于苯丁酸氮芥(chlorambucil,CHB)激活微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(microsomal glutathione S-transferase 1,mGST1)可显著加快催化CHB-GSH结合效应,探讨大鼠mGST1激活对CHB致不同来源肿瘤细胞株毒性的影响.方法:取雄性Sprague-Dawley大鼠肝脏,制备微粒体,去除胞浆GST的污染,获得纯化mGST1并测其活性.分别设CHB组,CHB+GSH对照组以及CHB+GSH+mGST1组.分别与PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株培养24 h、48 h、72 h后,以IC50作为细胞损伤指标;作用8 h后以JC-1染色评价线粒体膜电位(△ψm)改变作为损伤早期指标;作用48 h以后以AO/EB染色差异作为细胞核损伤后期指标.结果:在mGST1存在环境下,24 h、48 h、72 h PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株IC50均有显著增加.72 h CHB+GSH对照组PC-3、K562、HepG2和P388D1细胞株的IC50分别为(6.13±2.42)μmol/L、(3.77±0.95)μmol/L、(5.36±3.06)μmol/L和(9.42±1.77)μmol/L;CHB+GSH+mGST1组显著高于CHB+GSH对照组,相应IC50(15.01±3.47)μmol/L(P＜0.001)、(8.33±1.72)μmol/L(P＜0.001),(26.74±5.45)μmol/L(P＜0.001)和(16.93±0.85)μmol/L(P＜0.001).并伴有线粒体△ψm降低和核损伤减轻,呈明显的时效关系.结论:mGST1在富含GSH溶液中,可显著降低CHB对上述肿瘤细胞株的细胞毒性作用.

目的:探索白三烯C4(LTC4)合成酶系在小鼠刀豆蛋白A(Con A)肝损伤时的基因表达谱,及环孢素A(Cs A)对其表达水平的调控.方法:雄性Balb/c小鼠尾静脉注射Con A致肝损伤,另设尾静脉注射Cs A预给药.检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)评价肝功能,光镜检查肝组织学损伤,RT-PCR检测肝LTC4合酶(LTC4S)、微粒体谷胱甘肽S-转移酶2(mGST2)和mGST3基因的表达.结果:血清转氨酶和病理组织学结果表明:Con A注射2 h后肝脏即有明显损伤,8 h达到高峰;mGST2基因表达在2 h明显上调(170%),8 h达高峰(190%),而LTC4S和mGST3基因表达无明显改变.Cs A预给药可阻断Con A引起的肝脏损伤,并部分抑制mGST2基因表达上调,但对LTC4S和mGST3基因表达无影响.结论:Con A致小鼠肝损伤时,mGST2基因表达显著上调,而LTC4S和mGST3基因表达差异不明显.Cs A预处理能有效阻断ConA引起的肝损伤,但不能完全抑制mGST2基因表达上调.

目的:研究三萜类化合物对半乳糖胺(D-GalN)和四氯化碳(CCl4)损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用及其机制.方法:两步灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,评价积雪草酸(asiaticacid,AA)和β-甘草次酸(β-glycyrrhetinic acid,GA)对D-GalN和CCl4损伤原代培养肝细胞的保护作用.光镜评价细胞生长形态,MTT法测定细胞活性,测定细胞上清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH);并以荧光分光光度法测定细胞中活性氧(ROS),细胞上清活性氮终产物(NOx)和细胞内谷胱甘肽(GSH)含量;用JC-1法测定细胞线粒体膜电位(△ψm).结果:AA和GA均可显著抑制D-GalN所致的AST和LDH升高(P＜0.05),AA尚能提高细胞存活率(P＜0.05);AA和GA也能显著抑制CCl4所致的LDH释放(P＜0.05).AA和GA均显著减少两种化学损伤细胞ROS生成和NOx释放,明显改善D-GalN所致细胞线粒体△ψm的降低;AA尚显著抑制两种化学损伤细胞内GSH降低.结论:三萜类化合物对D-GalN和CCl4致原代培养大鼠肝细胞损伤有保护作用,其机制与抑制细胞ROS、NOx生成和GSH降低相关,对D-GalN损伤尚有改善线粒体膜电位作用.

目的:检测3-(2-氯苯基)-1-(2-羟基-4,6-二甲氧基-3-((-N,N-甲基乙基胺)甲基)苯基)-丙-2-烯-1-酮(DMF)对人前列腺癌PC3细胞的抗肿瘤活性,并对相关作用机制进行研究.方法:采用MTT法测定DMF对PC3细胞增殖的体外抑制作用;流式细胞术检测PC3细胞凋亡率;JC-1染色观察线粒体△ψm变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达.结果:DMF对PC3细胞具有显著的抗增殖作用.流式细胞术结果表明,这种抗增殖作用是通过诱导细胞凋亡实现的.DMF可诱导PC3细胞的线粒体膜电位(△ψm)下降,并呈明显的时间和剂量依赖效应.Western blot结果显示,DMF促进PC3细胞内procaspase-3活化及其下游底物PARP降解.同时,DMF还促进Bax蛋白表达上调和Bcl-2蛋白表达下调,使Bax/Bcl-2比值明显增加.此外,DMF可抑制PC3细胞内p38蛋白的磷酸化.结论:DMF可显著抑制PC3细胞增殖,其促凋亡作用可能是通过线粒体信号转导途径实现的.

目的:探索3-(4-溴苯基)-2-(乙砜基)-6-甲基喹喔啉-1,4-二氧化物(Q39)在缺氧条件下诱导人白血病K562细胞凋亡的作用机制.方法:①MTT法测定Q39对K562细胞的体外抑制作用,计算其半数抑制浓度(IC50).②4,6-Diamidino-2-Phenylindole(DAPI)荧光染料染色观察细胞的凋亡情况.③流式细胞术测定K562细胞凋亡率.④JC-1染色法观察Q39对K562细胞线粒体膜电位(△ψm)的影响.⑤Western-blotting法检测低氧条件下细胞内procaspase-3、cleaved caspase -3、PARP、Bax、Bcl-2和HIF-1α蛋白表达的变化.结果:在缺氧(3%O2)条件下,Q39对K562细胞表现出较强的体外抑制增殖作用,IC50为(0.21±0.05)μmol/L.经DAPI染色证实,Q39作用6 h后开始诱导K562细胞凋亡,后期细胞体积缩小,并出现凋亡小体.流式细胞术结果显示:K562细胞与Q39共孵育0、6、12和24 h的凋亡率分别为2.8%、3.2%、5.9%和19.2%.JC-1染色实验结果显示:孵育0、6、12、24和48 h后Q39使K562细胞的线粒体△ψm呈明显下降趋势,并且具有时间依赖关系.Western- blotting结果显示:Q39降低K562细胞的HIF-1α、procaspase-3和Bcl-2蛋白表达,明显增加Bax和cleaved caspase-3蛋白表达,并且促使PARP裂解.结论:Q39在缺氧条件下对K562细胞有较好的抑制作用,并能通过降低HIF-1α蛋白表达和调节其他凋亡相关蛋白表达,促使K562细胞线粒体△ψm下降,诱导细胞凋亡.Q39诱导细胞凋亡可能是通过线粒体和HIF-1α信号转导通路实现的.

目的:研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响.方法:在培养的C6细胞,加入DHA 1～125 μmol/L作用24、48、72 h.以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst 33342染色,观察细胞凋亡;以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactiVe oxygen species,ROS)变化.结果:DHA 5～125 μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48 h后的IC50是23.4μmol/L;5～25 μmol/L能诱导细胞凋亡(P＜0.05);5～125 μmol/L DHA可增高细胞内的ROS(P＜0.01).结论:DHA能够抑制C6细胞增殖,并诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关.

目的:研究早期胃癌淋巴结微小转移的临床病理学及生物学特征,探讨微小转移的诊断、治疗及其预后,阐明早期胃癌淋巴结转移发生、发展机理.方法:以11例有微小淋巴结转移者作为微小转移组,以46例有淋巴结转移者作为对照组.应用免疫组织化学染色检测ssDNA、bcl-2、p53、c-myc、E-cabherin、Ki-67和CD34.将各组的肿瘤灶亚分类为表层部、浸润部和淋巴结部,对各病例的各部位、各个指标进行统计学分析.结果:微小转移组中表层部的ssDNA阳性率高于对照纽、浸润部和淋巴结部,bcl-2的阳性率高于浸润部和淋巴结部,c-myc阳性率高于对照组;其淋巴结部的E-cadherin阳性率和微血管面积比低于对照组;其表层部和淋巴结部的Ki-67阳性率低于对照组.微小转移组中淋巴结等于或小于4 mm者占27.3%.结论:ssDNA、E-cadherin和Ki-67低表达的早期胃癌癌细胞恶性程度较高,黏附力较低,但增殖能力较弱,部分处于静止状态;而微血管增加是转移灶形成和发展的基础.

目的:通过检测胃肠道间质瘤中血小板衍生生长因子受体-α(PDGFR-α)的表达情况,探讨PDGFR-α在胃肠道间质瘤中的诊断及预后意义.方法:应用免疫组织化学EnvisionTM二步法检测了119例胃肠道间质瘤中的PDGFR-α蛋白的表达情况,并与非胃肠道间质瘤进行对照研究.结果:在胃肠道间质瘤中PDGFR-α的阳性表达率为65.5%(78/119),其中,极低危险性、低度危险性、中度危险性和高度危险性的阳性率分别为52.9%(9/17)、71.0%(22/31)、67.9%(19/28)和65.1%(28/43),但各组之间PDGFR-α的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).胃肠道间质瘤和非胃肠道间质瘤PDGFR-α的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PDGFR-α联合CD117应用于胃肠道间质瘤的检测,特别是对一些CD117表达阴性的胃肠道间质瘤诊断及鉴别诊断具有重要的临床意义,但其不能作为胃肠道间质瘤分化程度的指标.

目的:探讨氧氟沙星降低内毒素对大鼠肝肺综合征的肺损伤保护作用.方法:结扎SD大鼠胆总管,建立肝肺综合征(HPS)动物模型.将大鼠分成3组(每组10只),假手术组:分离大鼠胆总管,腹腔注射生理盐水2 ml;HPS模型组:结扎大鼠胆总管,腹腔注射生理盐水2 ml;氧氟沙星组:结扎大鼠胆总管后腹腔注射左旋氧氟沙星(20 mg/kg体重).6周后检测血清内毒素,血、腹水、胆汁培养需氧或厌氧菌,血气分析,测定门静脉压力,肺干重/湿重比,肺灌洗液和肺组织匀浆中髓过氧物酶含量及丙二醛浓度,并评价肺组织病理变化.结果:与HPS模型组比,氧氟沙星组血浆内毒素浓度显著下降[(59±6.2 vs 268±35.6)ng/L,P＜0.01],门静脉压力[(19.28±2.3 vs 17.80±2.18)cm H2O,P＜0.01]、肺组织肺干重/湿重比(5.1±0.7vs 4.9±0.7,P＜0.01)、肺髓过氧物酶[(0.40±0.10vs 0.24±0.03)U,P＜0.01]和丙二醛[(0.32±0.05 vs 0.22±0.03)μmol/L,P＜0.01]含量均有显著降低,肺组织炎症改变明显减轻.结论:降低内毒素可以减轻肝肺综合征的肺损伤.

目的:研究外源性一氧化碳(carbon monoxide,CO)对大鼠离体心脏缺血复灌的作用及其机制.方法:采用Langendoff离体心脏灌流模型,用结扎心脏冠脉前降支30 min造成心肌缺血,松开结扎120 min作为再灌.观察心脏收缩功能、心肌酶学和心肌梗死面积等指标.结果:25 μmol/LCORM-2(外源性CO释放剂)显著改善了离体心脏缺血复灌时心功能的损伤,降低了乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)的释放,减少了梗死面积,但对冠脉流量的影响不大.10 μmol/LCORM-2可减少LDH、CK和心肌梗死面积,但对心功能的影响不明显;而100μmol/L CORM-2却可增加缺血复灌心肌LDH的释放,加重心功能的损害.可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME、线粒体ATP依赖性钾离子通道阻断剂(mitoKATP)5-HD和血红素氧化酶-1(HO-1)抑制剂Znpp均可不同程度地阻断25μmol/LCORM-2缩小缺血心肌梗死面积的作用.L-NAME和Znpp可阻断CORM-2降低LVEDP的作用,但是CORM-2增高LVDP和

目的:探讨重症脓毒症患者游离氨基酸谱、免疫功能的变化及氨基酸静脉营养对游离氨基酸谱、免疫功能的影响.方法:将2005年2月～10月收治本院ICU的40例重症脓毒症患者随机分为2组,对照组给予葡萄糖注射液+20%中长链脂肪乳剂250 ml/d,氨基酸组给予葡萄糖注射液

目的:评价经扁平部巩膜切口直视下行睫状突激光手术治疗无晶状体眼性青光眼的疗效.方法:对20例(20只眼)无晶状体眼性青光眼作扁平部三切口,行前段玻璃体切割,术中将532半导体激光器导管经扁平部切口插入,在眼内照明直视下进行180°范围的睫状突光凝治疗.术后观察视力、眼压、眼前段组织反应等,平均随访时间13个月.结果:本组患者术前眼压与术后最后一次随访眼压[(39.75±6.27vs 21.35±2.52)mmHg]比较,差异有统计学意义(P=0.000).术后第1、3个月时睫状体超声生物显微镜检查,术区睫状突有萎缩性改变.结论:经扁平部巩膜切口直视下行睫状突光凝术治疗无晶状体眼性青光眼能有效地降低眼压.

孤雌激活是指处于第二次减数分裂中期卵母细胞不经过雄性配子的作用,而在某些理化因素的刺激下恢复并完成减数分裂,进行有丝分裂发育到胚胎的过程.卵母细胞的激活是以Ca2+为第二信使,成熟促进因子(MPF)、细胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK)、细胞静止因子(CSF)等细胞因子灭活综合作用的结果.人工孤雌激活方法包括物理性激活和化学性激活以及联合激活方法,人卵母细胞的孤雌激活多以化学激活为主.孤雌激活的效果与激活方法、卵母细胞的卵龄、来源和培养条件等有关.