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当期目录

2009年, 第2期 刊出日期:2009-03-25 上一期    下一期
本期栏目: 专题报道  原著  经验交流  综述 
专题报道
小鼠B7-H4重组蛋白的表达及鉴定   收藏
钱韵;姚航平;程林芳;沈玲;古丽娟;陶岚;张立煌
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 117-124.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.001
摘要( 277 )     PDF(479KB)( 189 )

目的:构建小鼠B7-H4胞外区基因的真核表达载体,转染酵母细胞以表达mB7-H4,并检测其生物学活性.方法:以mB7-H4的重组质粒为模板,在克隆引物上加入Xho I和EcoR I酶切位点,并用PCR方法扩增得到mB7-H4胞外区的基因片段,经Xho I和EcoR I双酶切后接入酵母表达载体Ppic9上,构建成Ppic9-mB7-H4重组质粒.经双酶切和核酸测序鉴定,将该重组质粒转染至酵母细胞,用PCR、Western Blot及ELISA等方法检测重组基因的表达,并鉴定表达蛋白的生物学活性.结果:转染Ppic9-mB7-H4重组质粒的酵母细胞内表达mB7-H4,诱导表达的mB7-H4能有效抑制CD3单抗活化的T淋巴细胞的增殖(相对抑制率为28.3;)和IL-2(相对抑制率为68.8;)、IL-4(相对抑制率为78.8;)、IL-10(相对抑制率为67.6;)、IFN-γ(相对抑制率为77.7;)等细胞因子的分泌.结论:成功构建了mB7-H4真核表达系统,并获得了有生物学活性的mB7-H4分子.

小鼠CCL21真核表达载体构建及趋化活性检测   收藏
宫婷;李鸿立;巴一
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 125-129.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.002
摘要( 261 )     PDF(363KB)( 162 )

目的:构建趋化因子CCL21的真核表达载体并表达蛋白,初步检测其趋化活性.方法:RT-PCR方法扩增CCL21 cDNA片段,并将扩增的片段插入pcDNA3.1真核表达载体,构建重组载体pcDNA3.1-mCCL21,将其转染到小鼠前胃癌细胞(mouse forestomach carcinoma,MFC).利用趋化小室法,检测表达产物针对树突状细胞(DC)趋化活性.结果:基因测序结果证实克隆产物为CCL21基因scya21b型,pcDNA3.1-mCCL21载体构建成功,Western印迹法检测到CCL21蛋白表达,转基因细胞的培养上清对树突状细胞具有显著趋化活性.结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-mCCL21,其表达产物具有针对DC的趋化活性.

抗体修饰抑制性Ly49受体对小鼠NK细胞功能的影响   收藏
胥昀;黄河
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 130-135.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.003
摘要( 239 )     PDF(314KB)( 177 )

目的:观察单克隆抗体修饰小鼠NK细胞的抑制性Ly49受体对NK细胞功能的影响.方法:免疫磁性分选近交系小鼠C57BL/6J脾脏NK细胞,以小鼠肿瘤细胞YAC-1和M1细胞为研究对象,观察单克隆抗体封闭NK细胞的抑制性受体Ly49C/I后,对YAC-1和M1细胞的杀伤作用和对M1细胞克隆形成的影响,并观察抗体修饰对C57BL/6J小鼠脾脏NK细胞与BALB/C小鼠脾单个核细胞之间单向混合淋巴细胞反应的影响.结果:抗体修饰后,NK细胞对M1细胞的杀伤能力增强(10.7;±0.5; vs 84.4;±2.9;),并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05);而对YAC-1细胞的杀伤作用则无明显的变化,仅0 μg/ml组与60 μg/ml组有统计学差异(P<0.05).抗体作用后,对M1细胞克隆形成的抑制率增高(8.2;±2.2; vs 94.0;±3.3;),并与抗体浓度呈现量效关系(P<0.05).混合淋巴细胞反应中反应细胞的增殖指数降低(0.398±0.025 vs 0.128±0.014),并具有统计学差异(P<0.05).结论:以抗体修饰抑制性Ly49受体有助于活化NK细胞,提高抗肿瘤能力.

hVEGF siRNA抑制A549细胞在裸鼠移植瘤的早期生长及血管新生   收藏
刘容;马文江;周建娅;杨光迪;周建英
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 136-144.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.004
摘要( 283 )     PDF(572KB)( 204 )

目的:探讨血管内皮细胞生长因子(human vascular endothelial growth factor,hVEGF)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对A549细胞裸鼠移植肿瘤生长以及对鸡胚尿囊膜(chorioallantoic membrane,CAM)上诱导新生血管的影响.方法:分别构建3个表达不同特异性hVEGF siRNA序列的质粒载体,与表达无关序列siRNA质粒载体分别转染A549细胞,用ELISA与realtime RT-PCR选出抑制hVEGF效果最佳的hVEGF siRNA质粒.G418筛选出稳定表达抑制效果最佳的hVEGF siRNA和表达无关序列siRNA的A549细胞,与未转染的A549细胞分别注射于裸鼠皮下,观察3组细胞在裸鼠皮下成瘤及肿瘤生长的速度.鸡胚尿囊实验:孵育至第9天的白皮受精种蛋随机分为4组,分别在鸡胚尿囊膜表面加未培养过A549细胞的DMEM培养液(阴性对照组),未转染的A549细胞培养上清液(阳性对照组),转染hVEGF siRNA的A549细胞培养上清液(hVEGF siRNA组),转染无关序列siRNA的A549细胞培养上清液(无关序列siRNA组),继续孵育48 h,取固定后的鸡胚绒毛尿囊膜于显微镜下计数血管分支点和血管分支长度.结果:hVEGF siRNA使A549细胞表达mRNA水平最大下降70;,分泌hVEGF水平最大下降48;.在裸鼠移植瘤模型中,hVEGF siRNA组比无关序列siRNA组肿瘤平均体积减少58;,肿瘤生长到50 mm3的平均时间延迟5.4 d,移植肿瘤组织匀浆hVEGF含量降低54;;而肿瘤的倍增时间与肿瘤生长速率差异不显著.在鸡胚尿囊膜实验中,阴性对照组加样液的hVEGF含量为0,hVEGF siRNA组加样液的hVEGF含量约占无关序列siRNA组和阳性对照组的40;~44;;血管分支点计数,hVEGF siRNA组,无关序列siRNA组与阳性对照组比阴性对照组增加45;~55;;血管分支总长度hVEGF siRNA组比阴性对照组增加约53;,无关序列siRNA组和阳性对照组比阴性对照组分别增加约97;及99;.CAM血管图上与阴性对照组比较VEGF siRNA组可见增多的血管分支,阳性对照组和无关序列siRNA组上还可以见血管分支增粗、增长.结论:构建并证实质粒介导的hVEGF siRNA能抑制A549细胞分泌VEGF,从而抑制A549细胞诱导鸡胚尿囊膜的血管新生.在裸鼠移植瘤模型中,hVEGF siRNA能抑制肿瘤早期生长,对肿瘤后期的生长速率无显著抑制.

内皮细胞肌球蛋白轻链激酶调控纤维肉瘤细胞血管外游走的实验研究   收藏
辛华;韩振国
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 145-150.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.005
摘要( 266 )     PDF(359KB)( 154 )

目的:阐明内皮细胞肌球蛋白轻链激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制.方法:利用血管外游走的体外模型,观察纤维肉瘤细胞(HT1080)的血管外游走状况,并测定游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化,进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术,评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平.结果:纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外,并且游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平升高.内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂(ML-7)能够抑制上述变化,并具有浓度依赖性.结论:内皮细胞肌球蛋白轻链激酶可通过调控肌球蛋白轻链的磷酸化水平,引起骨架重组、细胞收缩,从而导致纤维肉瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走.

成纤维细胞与结肠癌细胞相互作用对IGFBP7表达的影响   收藏
申秀锦;张有为;邓红;陈露露;陈平圣
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 151-157.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.006
摘要( 185 )     PDF(452KB)( 287 )

目的:试图证实结肠癌细胞与成纤维细胞相互作用能影响胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)的表达,初步探讨肿瘤-间质相互作用对结肠癌生长的作用.方法:结肠癌细胞系SW480与成纤维细胞HELF共培养于RPMI 1640培养液中,分别于0、48、72和96 h收集细胞,采用RT-PCR和免疫细胞化学法检测两种细胞中IGFBP7的表达.结果:两种细胞经共培养48 h后,SW480细胞IGFBP7 mRNA和蛋白表达均上调,HELF细胞原不表达IGFBP7,经与肿瘤细胞共培养48 h后,开始表达IGFBP7并与共培养时间成正相关.结论:结肠癌细胞与成纤维细胞相互作用促进二者表达IGFBP7,提示肿瘤-间质相互作用可能对结肠癌演进具有抑制作用.

虫草多糖增强雷公藤内酯醇诱导的HL-60细胞凋亡作用及其机制   收藏
沈悦娣;邵雪婷;倪有娣;许航;童向民
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 158-162.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.007
摘要( 260 )     PDF(384KB)( 173 )

目的:探讨虫草多糖增强雷公藤内酯醇诱导白血病细胞HL-60的凋亡作用及其可能的分子机制.方法:将HL-60细胞分为对照组,雷公藤内酯醇对照组(5 ng/ml)和虫草多糖预处理+雷公藤内酯醇作用组.选用二种不同虫草多糖浓度(100 μg/ml,200 μg/ml)的药物处理HL-60细胞18 h,通过MTT法测定各组细胞的存活率,并用流式细胞仪通过Annexin V/PI双染法检测各组细胞的凋亡百分比.用Western blot方法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB的表达.结果:不同浓度的虫草多糖能抑制雷公藤内酯诱导的HL-60细胞的存活率,而且虫草多糖可协同增加雷公藤内酯诱导的HL-60细胞的凋亡百分比,呈现出明显的剂量依赖关系;Western blot检测显示,虫草多糖降低Caspase-3、6、7、9和NF-κB的蛋白表达,且随着浓度的升高,蛋白的表达量表现出逐渐减少的趋势.结论:虫草多糖对雷公藤内酯诱导的HL-60细胞凋亡有不同程度的抑制作用,其机制可能与抑制细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB信号传导通路的激活有关.

丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞EGF及其受体表达的影响   收藏
翟学敏;和水祥;任牡丹;陈静宏;王治伦;韩敏;侯和磊
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 163-169.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.008
摘要( 247 )     PDF(430KB)( 206 )

目的:观察丹参酮ⅡA对人肝癌SMMC-7721细胞EGF及其受体表达的影响.方法:体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,经不同浓度丹参酮ⅡA作用后,用MTT法检测细胞增值;流式细胞仪及Hoechst33342染色荧光显微镜观察细胞凋亡;免疫细胞化学SP法及灰度测定表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达;放射免疫法检测EGF含量.结果:丹参酮ⅡA对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性,以0.5 μg/ml作用终浓度抑制效果最明显,其48 h的抑制率为72.5;,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);流式细胞仪检测显示:0.5 μg/ml丹参酮ⅡA作用后,随时间的延长,凋亡率逐渐升高,48 h达高峰,随后逐渐下降[24 h,48 h,72 h凋亡率分别为(4.06±0.27);、(7.58±0.56);、(5.23±0.13);],与对照组比较,各处理组都有显著性差异(均P<0.01);Hoechst33342染色可见凋亡细胞皱缩,核染色质浓缩,核碎裂,亦可见典型的凋亡小体;免疫细胞化学SP法显示:随着丹参酮ⅡA作用浓度的增大,EGF及EGFR表达下调,其0.5 μg/ml组48 h的高表达率分别为10;,20;,灰度值分别为181.52±1.63,179.37±1.59,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);放射免疫法显示:丹参酮ⅡA作用组细胞培养上清液中EGF含量明显下降.结论:丹参酮ⅡA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的细胞增殖,促进其凋亡,此作用可能与细胞内EGF及EGFR表达下调有关.

外周血血小板计数与食管癌临床病理相关性研究   收藏
余新春;吴善水;陆晓青;盛李明;胡雅国;赵健;李娟梅;邵海燕
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 170-173.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.009
摘要( 209 )     PDF(194KB)( 172 )

目的:研究外周血血小板与食管癌的关系.方法:比较415例食管癌患者及325例对照人群血小板水平,并分析血小板水平与食管癌患者临床病理参数之间的关系.结果:食管癌患者外周血血小板水平(286±88)×109/L显著高于正常人群(204±114)×109/L;食管癌患者血小板增多的比例为23.6;,高于对照组(P<0.05).食管癌患者血小板与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05).结论:血小板升高可能与食管癌的发展有关.

原著
全基因组预测Phenylobacterium zucineum HLK1T的外排蛋白   收藏
严智宇;丁宗辉
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 174-180.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.010
摘要( 267 )     PDF(387KB)( 189 )

目的:通过搜索Phenylobacterium zucineum HLK1T全基因组编码蛋白的N-端信号肽,跨膜α-螺旋等外排信号来预测其外排蛋白.方法:应用SingalP V3.0、LipoP V1.0、Phobius和TMHMM 2.0对HLK1T基因组所编码的蛋白进行综合预测;对保守序列用手工方法进行搜索,预测Ⅳ型蛋白和TAT通路蛋白.对预测到的外排蛋白进行COG分类.结果:HLK1T基因组编码的3 861个蛋白中有1 378个(35.7;)为外排蛋白,其中以跨膜蛋白为最多,共预测到735个(占总蛋白的19.0;,外排蛋白的53.3;).此外,它还编码499个Ⅰ型分泌蛋白(12.9;,36.2;)和101个脂蛋白(2.6;,7.3;),以及4个Ⅳ型蛋白和12个TAT通路蛋白.根据COG分类,这些外排蛋白中与无机离子转运和代谢相关的P蛋白以及功能未明的S蛋白为最多.结论:HLK1T编码大量外排蛋白,这些蛋白可能在细菌与宿主的相互作用以及胞内寄生的过程中发挥重要作用.

药物在口腔黏膜中的渗透性研究   收藏
傅旭春;潘晓娇
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 181-185.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.011
摘要( 271 )     PDF(267KB)( 164 )

目的:研究药物的理化性质对口腔黏膜渗透性的影响.方法:选取苯甲酸和咖啡因及氢化可的松为模型药物,以离体猪颊黏膜作为动物模型,测定渗透系数.结果:苯甲酸和咖啡因及氢化可的松透过口腔黏膜的渗透系数分别为:(1.01×10-4±1.64×10-5)cm·s-1,(2.75×10-5±1.79×10-6)cm·s-1和(2.49×10-5±6.32×10-6)cm·s-1.结论:药物的口腔黏膜渗透性大于人皮渗透性.对于不同的药物,其增大倍数可能相差很大,苯甲酸和咖啡因及氢化可的松通过口腔黏膜的渗透系数分别是通过人皮的14倍和989倍及389倍.

磁共振DTT成像对急性腔隙性脑梗死患者运动功能预后评估的价值   收藏
刘鸿明;赖灿;章士正
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 186-193.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.012
摘要( 264 )     PDF(691KB)( 248 )

目的:通过对人体内重要的大脑运动神经纤维"皮质脊髓束"(corticospinal tract,CST)进行扩散张量白质纤维束示踪成像(diffusion tensor tractography,DTT),显示CST和梗死灶之间的空间关系,用于病灶的准确定位和评估急性腔隙性脑梗死患者的运动功能预后状况.方法:研究对象是病灶位于基底节豆纹动脉区或侧脑室旁辐射冠区,并且伴有中~重度肢体运动功能障碍的急性腔隙性脑梗死患者28例,采集急性期MR数据并合成皮质脊髓束的三维DTT图,根据CST与腔隙性脑梗死灶的空间关系将患者分成3组:第1组梗死灶与CST相邻,第2组部分CST穿过梗死灶,第3组整个CST穿过梗死灶(病灶将神经束包绕).再分别于急性期(发病3d内)、慢性早期(8~14d)及慢性期(30~60d)前瞻性追访这些患者的神经运动功能变化情况,评价该神经束的受累情况与患者预后变化的关系.结果:在急性期,对第1组患者(12/28)与第2组(11/28)采用美国国立卫生研究所的中风评分量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS),运动功能评分没有显著性差异(U=-1.430,P>0.05),而第2组患者NIHSS运动功能评分低于第3组患者(5/28),且差异有显著性(U=-2.676,P<0.01).而在慢性期,这3组患者NIHSS评分分别经两两比较,显示第1组患者NIHSS评分低于第2组,并且差异有显著性(U=-2.501,P<0.05),第2组低于第3组,差异也有显著性(U=-2.948,P<0.01).从这3组患者急性期到慢性期的NIHSS运动功能评分值变化来看,第1组患者运动功能恢复最好;第2组患者预后比第1组稍差,患者通常残留轻度的运动功能障碍;第3组患者运动功能预后最差,患者普遍残留明显残疾.病灶内相对ADC值为0.714(患侧相对于正常侧下降约28.6;),相对FA值为0.725(即患侧较正常对侧下降27.5;).结论:磁共振扩散张量成像(DTI)的纤维束成像可对梗死灶准确定位,并有助于更好地预测腔隙性脑梗死患者运动功能的恢复前景.

经验交流
阑尾原发性恶性肿瘤22例临床病理分析   收藏
黄斌;翟梅娟;刘红胜;仇玲玲;孙丽君;徐锦屏
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 194-198.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.013
摘要( 259 )     PDF(318KB)( 219 )

目的:探讨阑尾原发性恶性肿瘤的临床病理及免疫组化特征.方法:对22例阑尾原发性恶性肿瘤进行临床资料回顾及行免疫组化研究.结果:原发性恶性肿瘤22例(类癌19例,腺癌3例),类癌表达内分泌标记阳性,腺癌表达上皮性标记而内分泌标记阴性.结论:阑尾原发性恶性肿瘤少见,临床术前表现为炎症,多由术后病理检查偶尔发现,免疫组化有利于明确诊断.

原发性肺非霍奇金淋巴瘤17例CT表现与病理   收藏
梁文杰;周先勇;许顺良
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 199-203.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.014
摘要( 260 )     PDF(340KB)( 301 )

目的:探讨原发性肺非霍奇金淋巴瘤(primary pulmonary non-Hodgkin′s lymphoma,PPNHL)的肺部CT表现,提高对本病的诊断.方法:回顾性分析1992年8月-2007年12月经CT引导下肺穿刺活检或手术切除后经病理学证实的17例PPNHL的CT表现,结合病理结果分析其病理过程,并探讨CT特征出现的病理学基础.结果:17例患者中7例病变累及双肺,6例累及右肺,4例累及左肺,其中12例累及右肺中叶.肺内CT表现形式多样:①单发肿块(结节)型5例,其中有空气支气管征3例、病灶跨叶分布1例、轻至中度强化3例;②肺炎样实变型6例,其中有空气支气管征6例、病灶跨叶分布3例、轻至中度强化3例;③多发结节型1例,并有空气支气管征;④混合型5例,其中有空气支气管征5例、跨叶分布2例、轻至中度强化4例.病理组织学均表现为支气管周围间隙的淋巴瘤细胞的浸润.结论:PPNHL的CT表现有一定特点:肺内多种形态的病变同时出现,右肺中叶多有累及,病灶内见明显空气支气管征,病灶有跨叶分布和轻至中度强化等.

经桡动脉6F指引导管处理冠状动脉分叉病变   收藏
周斌全;傅国胜;孙勇
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 204-207.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.015
摘要( 287 )     PDF(214KB)( 270 )

目的:探讨经桡动脉6F指引导管处理冠状动脉分叉病变的可行性和安全性.方法:回顾性分析自2003年10月至2007年2月经桡动脉6F指引导管行介入治疗的1258例患者.对于大多数分叉病变,采用单支架植入,但对于分支较大且重要,分支口部或近端显著狭窄时采用双支架植入.结果:共有295处分叉病变,204处病变采用单支架,91处采用双支架植入策略.单支架组有2例因边支撕裂而植入支架.计划双支架组最终有73例实行Crushing支架技术(step crushing术46例,modified ballon crushing 24例,反向crushing 3例),5例采用T支架技术,3例Cullote支架术,5例采用改良V支架技术,5例采用分步对吻支架术.无急性心肌梗死及死亡,1例发生冠脉穿孔导致心包压塞.结论:经桡动脉6F指引导管处理冠状动脉分叉病变是安全可行的.

综述
TM4SF与整合素共同调节肿瘤转移   收藏
朱林静;来翀;胡虎
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 208-214.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.016
摘要( 328 )     PDF(463KB)( 233 )

转移是恶性肿瘤死亡的主要原因,TM4SF(跨膜四超蛋白家族)与整合素结合形成跨膜复合体,通过调节细胞的黏附和移动,对肿瘤的侵袭及转移过程起着重要作用.文中对近年来关于TM4SF的结构、与整合素结合的形式和特点,以及与肿瘤转移的有关机制进行了综述.

代谢性药物-药物相互作用的研究进展   收藏
刘彦卿;洪燕君;曾苏
浙江大学学报(医学版). 2009 (2): 215-224.   DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2009.02.017
摘要( 453 )     PDF(468KB)( 1007 )

许多药物的代谢途径可被联用药物抑制或诱导,有时会引起药物药理或毒理效应的显著变化.代谢性药物-药物相互作用发生率高,临床效应显著.制药工业和管理部门已经将药物-药物相互作用的研究从临床试验阶段转移至新药开发的早期阶段.代谢性药物-药物相互作用研究分为体内外试验,合理的研究设计不仅对于评价药物的安全性和有效性具有重要意义,而且可以节约研究成本,避免不必要的资源浪费.文中从研究背景、机理等方面介绍代谢性药物-药物相互作用的研究进展,并着重介绍相关试验设计,期望对国内制药工业及科学研究有所启发.