脓毒症系病原微生物入侵机体感染后所致的全身性炎症反应,是严重创伤、损伤、外科大手术后常见的并发症,是危重患者主要的死亡原因.脓毒症患者免疫功能和凝血纤溶的紊乱,促炎症反应和抗炎症反应间的不平衡是该疾病发生、发展的关键.早期目标导向、集束化治疗等并未明显降低脓毒症患者的死亡率.治疗脓毒症的突破点可能是如何调控机体免疫功能、维持促炎和抗炎平衡.关于氢气、一氧化碳、挥发性麻醉药等对脓毒症器官功能的保护作用为脓毒症防治提供一个全新的视野.

目的:观察重度脓毒症小鼠吸入氢气后的存活情况及其血清高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)的水平,探讨氢气对脓毒症动物器官功能保护作用的分子学机制.方法:采用盲肠结扎穿孔术诱导的小鼠重度脓毒症模型.248只小鼠随机分为4组:假手术组、假手术+氢气吸入组、重度脓毒症组和重度脓毒症+氢气吸入组.氢气治疗分别为盲肠结扎穿孔术或假手术后1 h和6 h吸入2,氢气1 h.观察各组小鼠不同时间点生存率和血清HMGB1水平的变化.结果:重度脓毒症小鼠的7 d生存率为0%(P<0.05),且不同时间点血清HMBG1明显升高(P<0.05);氢气治疗可使重度脓毒症动物的7 d生存率升高至60,(P < 0.05),且使血清HMBG1的水平明显降低(P < 0.05).结论:氢气吸入能降低重度脓毒症小鼠血清的HMGB1水平并提高其生存率.

目的:探讨外源性一氧化碳释放分子(CORM)2对急性肺损伤 (ALI )时肺部炎症反应的抑制作用.方法:建立小鼠LPS吸入肺损伤模型.实验动物分成4组:对照组(n＝8),LPS吸入致ALI组(n＝15),ALI+无活性CORM-2组(n＝15)以及ALI+CORM-2组(n＝15).在自制的16 cm×8 cm雾化发生罐中雾化LPS(终浓度500 μg/ml),实验组小鼠在雾化罐中放置30 min,对照组小鼠置于单纯的生理盐水雾化罐30 min,ALI+CORM-2组小鼠尾静脉注射CORM-2(8 mg/kg).检测动物肺组织髓过氧化物酶(MPO)、核因子κB(NF-κB) 活性、细胞间粘附分子-1 (ICAM-1)的表达,肺泡灌洗液中TNF-α和IL-1β水平.结果:ALI组肺组织中MPO及NF-κB活性迅速增强,同时肺组织ICAM-1蛋白水平亦显著升高.CORM-2干预后肺组织MPO及NF-κB活性被明显抑制(P<0.05), ICAM-1蛋白表达量也被显著抑制(P<0.05).肺泡灌洗液中TNF-α和IL-1β水平在CORM-2干预后较ALI组明显下降(P<0.05).结论:外源性一氧化碳释放分子能明显抑制肺组织NF-κB活性,减轻ALI肺组织粘附分子的表达,从而减轻组织中白细胞扣留,有效减轻肺部炎症反应.

目的:观察异氟醚、七氟醚和地氟醚对大鼠肺微血管内皮细胞(RLMVECs)ICAM-1和VCAM-1表达的影响,探讨吸入性麻醉药物保护肺泡毛细血管屏障功能的可能机制.方法:0.7 MAC、1.0 MAC、2.0 MAC的异氟醚、七氟醚和地氟醚处理经LPS(100 ng/ml)诱导6 h的RLMVECs,采用Western blot检测ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达量,RT-PCR半定量法检测ICAM-1水平.结果:1.0 MAC的异氟醚对LPS诱导的RLMVECs ICAM-1的表达有上调作用(P＜0.05);1.0 MAC的七氟醚、地氟醚对LPS诱导的RLMVECs ICAM-1的表达有下调作用(P＜0.05);2.0 MAC的地氟醚对RLMVECs ICAM-1的表达有上调作用(P＜0.05).不同吸入麻醉药物对LPS诱导的RLMVECs VCAM-1的表达作用随浓度上升而下调,呈剂量依赖性.结论:1.0 MAC的七氟醚和地氟醚对LPS诱导的RLMVECs ICAM-1的表达有下调作用,这可能是其在急性肺损伤时减少中性粒细胞募集、保护肺泡毛细血管屏障功能的分子学机制.

目的:观察体外循环(CPB)心内直视术患者外周血单个核细胞蛋白质表达谱的变化.方法:11例体外循环心内直视术患者,分别于体外循环前(T0)、体外循环主动脉开放后1 h(T1)和术毕(T2)3个时点抽取动脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),采用双向电泳和质谱方法比较、分析3个时间点差异蛋白的表达,并采用Western blot进行验证.结果:双向电泳和质谱鉴定出12个差异蛋白,其中S100A9表达量于CPB后1 h达到高峰,手术结束时开始下降,但未回复到术前水平(P<0.05).结论:体外循环能上调外周血单个核细胞S100A9等蛋白的表达.

目的:构建髓系细胞触发受体-1(TREM-1)的真核表达质粒.方法:利用RT-PCR从人外周血总RNA中扩增TREM-1 基因的全长cDNA,插入克隆载体pUCm-T,BamH I和Pst I,酶切后将目的片段插入真核表达载体pEGFP-C3,构建含有TREM-1的重组质粒pEGFP-TREM-1,转染293细胞,用荧光显微镜观察、Western-blot鉴定蛋白表达.将pEGFP-TREM-1重组质粒转染THP-1细胞,100 ng/ml LPS刺激24 h后,半定量RT-PCR检测TNF-α和IL-1β基因的 mRNA水平.结果:经酶切和基因测序证实,克隆的基因片段为TREM-1基因;经转染的293细胞在荧光显微镜下可见荧光,并能表达TREM-1蛋白;重组TREM-1蛋白具有生物学活性,能增强TNF-α和IL-1β基因的mRNA水平.结论:成功构建了能够表达TREM-1的真核表达质粒pEGFP-C3-TREM-1,为进一步研究该基因的功能奠定了实验基础.

目的:评价高容量血液滤过(high-volume hemofiltration treatment,HVHF)在早期重症脓毒症患者中的疗效.方法:将30例符合国际诊断标准的重症脓毒症患者纳入本研究,按照脓毒症集束治疗指南进行干预,在确诊24 h内行HVHF治疗,每日连续给予床旁HVHF治疗12～18 h,连续观察72 h.比较治疗前和治疗24 h、48 h、72 h后各时间点动脉血乳酸值、血清细胞因子(IL-6、IL-10)、C反应蛋白(CRP)和氧代谢指标[动脉血pH值、氧和指数(PaO2/FiO2)]等.结果:HVHF治疗24 h、48 h、72 h后脓毒症患者动脉血乳酸值和血清IL-6均明显降低(P<0.05),IL-10无明显变化(P>0.05),CRP在HVHF治疗48 h后显著下降,氧代谢指标得到明显改善(P均<0.05).结论:HVHF可通过清除血乳酸、促炎因子,减轻脓毒症患者过度的炎症反应,改善组织细胞的氧代谢.

炎性体(inflammasome)是位于胞内的大分子量、多种蛋白质组成的复合体,由胞内受体核苷酸结合寡聚化结构域样受体( nucleotide-binding oligomerization domain like receptors,NLRs)感受病原体及危险信号后组装而成.它通过活化半胱天冬酶-1(cysteinyl aspartate-specific protease-1,caspase-1),使细胞因子前体如proIL-1β、proIL-18等成熟、活化,介导机体固有免疫.炎性体的调节失控在脓毒症等免疫炎性疾病的发生发展中有着重要的作用,因而炎性体将是脓毒症防治的新靶标.

目的:研究海参脑苷脂(SCC)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的改善作用. 方法:通过在饲料中添加乳清酸复制NAFLD大鼠模型,将大鼠按体重随机分为对照组、模型组、海参脑苷脂低剂量组和海参脑苷脂高剂量组,喂食10 d后观察其血清、肝脏脂质和转氨酶活性的变化,以及肝脏脂肪酸组成变化. 结果:相比对照组,模型组血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量降低(P<0.05),海参脑苷脂可增加血清脂质含量(P<0.05);模型组肝脏TC和TG含量升高显著(P<0.05,P<0.01),不同剂量的海参脑苷脂均可降低肝脏脂质积累(P<0.05,P<0.01);模型组谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平升高(P<0.05,P<0.01),不同剂量的海参脑苷脂可改善肝脏损伤水平(P<0.05,P<0.01);另外,模型组肝脏硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)活性显著升高(P<0.05),海参脑苷脂明显降低该酶活性(P<0.05).结论:海参脑苷脂可显著改善乳清酸诱导的大鼠脂肪肝,并且呈现明显的剂量效应.

目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响.方法:根据RegIα cDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的全序列,经测序其与目的基因序列一致.将获取的RegIα序列经TA克隆和亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒载体中;将构建的RegIα过表达质粒载体pIRES2-RegIα-EGFP转染胃癌细胞株MKN28,并用空载体pIRES2-EGFP作为对照,利用G418筛选稳定表达pIRES2-RegIα-EGFP的MKN28细胞株.通过RT-PCR及Western blot检测转染后细胞RegIα在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法和流式细胞仪分别检测RegIα过表达后MKN28细胞增殖及拮抗H2O2诱导凋亡的变化.结果:成功构建RegIα cDNA的全序列表达质粒.RT-PCR及Western blot检测显示:转染pIRES2-EGFP质粒的MKN28细胞RegIα mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);MTT试验显示:转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05),而且拮抗H2O2凋亡的能力增强(P<0.05).结论:RegIα的过表达能明显增强胃癌细胞MKN28的增殖和拮抗H2O2诱导凋亡的能力.

目的:探讨线粒体融合基因2(Mfn2)在肝癌患者中的杂合性缺失(LOH)特点及其临床意义.方法:选用位于Mfn2附近的4个多态性微卫星标记,对29例肝癌患者进行LOH分析.结果:微卫星D1S2667、D1S2740、D1S434和D1S228的LOH发生率分别为21%、23%、21%和22%.Mfn2基因LOH患者的HBV感染,与患者年龄、肿瘤大小、包膜的完整性及分化程度存在一定的相关性(P<0.05);与患者性别、HCV感染、有无癌栓、肝内肿瘤的多发性、有无肝硬化以及AFP值高低无明显相关(P>0.05).结论:肝癌患者Mfn2基因发生LOH与临床病理参数有一定的相关性,其在肝癌的发生和发展过程中起到一定作用.

目的:探讨非降脂剂量的辛伐他汀对糖尿病大鼠肾间质结缔组织生长因子(CTGF)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(C组),糖尿病组(D组),糖尿病辛伐他汀干预组(DS组).模型建立后,第6周及第12周时各组处死大鼠10只,称取体重、肾重,测定血糖(Glu)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、肌酐(SCr),留取尿液测定24 h尿白蛋白排泄量(UAE),并用免疫组化方法检测肾间质结缔组织CTGF、α-SMA.结果:6周及12周时各组间SCr、 LDL、 HDL及 TG相比无显著性差异(P>0.05);6周时DS组的肾间质CTGF、α-SMA表达水平明显少于D组(P<0.05),但与C组相比无显著性差异(P>0.05).12周时DS组的肾间质CTGF、α-SMA表达水平明显少于D组(P<0.05),但高于C组(P<0.05). 结论:非降脂剂量的辛伐他汀可能通过抑制CTGF的表达和减少肾间质肌成纤维细胞的数量延缓肾小管间质纤维化进展.

目的:观察慢性紫外线照射对皮肤屏障功能及光老化进程的影响.方法:156例杭州地区健康志愿者分别在项部、手背、锁骨周围前胸部位(曝光部位)和腰部、臀部、腹部(非曝光部位)接受检测.以多功能皮肤测试仪MPA 9的CM 825探头进行皮肤含水量检测,以TM 300探头进行皮肤经皮水分丢失量(transepidermal water loss,TEWL)检测,RVM 600探头检测皮肤弹性(Ur/Uf值),激光多普勒血流仪(laser doppler flowmetry,LDF)检测皮肤相对血流量(PU).结果:>50岁组曝光部位的皮肤含水量(12.78±2.36)较非曝光部位(23.68±3.24)明显减少(P=0.036).>50岁组曝光部位的TEWL水平最高(12.98±2.86)g·m^-2·h^-1.各年龄段曝光部位皮肤的TEWL均较非曝光部位高,但并无统计学差异(P>0.05).>50岁组曝光部位皮肤的皮肤弹性Ur/Uf值低至(0.11±0.07),较非曝光组(0.32±0.1)明显降低(P=0.028).各年龄组曝光部位的PU值与非曝光部位相比无统计学差异.结论:曝光部位、>50岁组健康人群的皮肤相对血流量无明显增长,但含水量降低,TEWL升高,皮肤弹性下降,表明慢性紫外线照射可损伤皮肤屏障功能,从而促进光老化进程.

目的:研究白桦脂酸(betulinic acid,BA)舒张血管效应及抗血管氧化应激损伤的血管保护作用,并探讨其内在机制.方法:取胸主动脉进行离体灌流,用累积加药法观察BA对苯肾上腺素(phenylephrine,PE)预收缩的内皮完整血管环和去内皮血管环的舒张作用,并将血管随机分为正常对照组、BA对照组、H2O2组和BA+H2O2组,并在用PE预收缩后,检测血管环对乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)诱导的内皮依赖性舒张反应,血管环张力变化均通过PowerLab生物信号采集系统记录.结果:BA浓度依赖性(10^-7 mol/L～10^-4 mol/L)舒张PE(10^-6 mol/L)预收缩的内皮完整胸主动脉环,pD2值为5.61±0.18,半数有效浓度(EC50)为(2.45×10^-6 )mol/L;一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,10^-4 mol/L)预处理抑制了该作用,而用吲哚美辛(10^-5 mol/L)预处理则无抑制作用.但对PE预收缩的去内皮血管BA无明显舒张作用.H2O2(5×10^-4 mol/L)孵育15 min,能降低ACh(10^-9 mol/L～10^-5 mol/L)诱导的血管舒张作用;EC50的BA孵育30 min,能抑制H2O2氧化应激损伤所致的血管内皮依赖性舒张功能下降.结论:BA具有内皮依赖性舒张血管作用,BA可以减轻H2O2诱导的大鼠胸主动脉内皮依赖性舒张功能降低,这可能与其降低血管内皮氧化应激,维持血管内皮一氧化氮活性有关.

目的:探讨双核素心肌同步显像(DISA)在心肌梗死患者治疗策略和疗效评估中的价值.方法:回顾性分析行DISA的87例心肌梗死患者,选择其中在治疗前后均成功进行DISA的63例患者进入本研究,所有患者均在术前2～3周、术后11～13周行DISA.根据治疗方法和有否存活心肌,分为A组:冠脉血运重建术(A1组:有存活心肌,A2组:无存活心肌);B组:冠脉血运重建术+干细胞移植(B1组:有存活心肌,B2组:无存活心肌);C组:干细胞移植(C1组:有存活心肌,C2组:无存活心肌).采用SPSS13.0软件进行数据处理.结果:①63例患者中有存活心肌的30例,其中A1组16例,B1组6例,C1组8例;无存活心肌的33例,其中A2组9例,B2组7例,C2组17例.②A2组治疗前后,心肌梗死区心肌血流灌注和代谢均无明显改善,灌注显像或代谢显像的DF值比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05),其余5组治疗后均有不同程度改善,DF值比较差异均有统计学意义(P值均<0.05);心肌存活组经治疗后血流灌注和代谢的改善程度,明显优于无心肌存活组,差异有显著统计学意义(P值均<0.05),同时B1组优于A1和C1组,B2优于A2和C2组,差异均有统计学意义(P值均<0.05或<0.01).结论:①DISA显像能很好地评估心肌存活情况,有助于对心肌梗死患者治疗策略的选择;②DISA显像能较好地观察和评价梗死心肌治疗后的改善程度.

Barrett食管、不典型增生到腺癌的演变理论已被广泛接受.高度不典型增生常伴发在癌的周围或与癌同步发生.利用内镜技术对Barrett食管伴高度不典型增生者进行随访和治疗,将有助于患者癌变的早期发现及治疗.

不动杆菌已成为医院感染的主要致病菌.随着碳青霉烯类抗生素的广泛应用,其多重耐药菌尤其是碳青霉烯类耐药菌株的出现,给临床治疗带来了很大的难题.研究发现,不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要是灭活酶的产生,其中以染色体或质粒介导的各种碳青霉烯酶最为重要.而舒巴坦和β-内酰胺类药物合用对不动杆菌有一定的治疗协同作用.

纤维组织细胞瘤是一种由纤维母细胞和组织细胞分化的瘤细胞所构成的肿瘤,来源于原始间质细胞,根据临床行为和病理学特征可分为良性、中间型和恶性3种.现报道1例发生在双侧球后肌锥内的弥漫性良性纤维组织细胞瘤(benign fibrous histiocytoma,BFH).