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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2008, Vol. 37 Issue (1): 51-59    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2008.01.010
原著     
鼠抗人CD14单链抗体ScFv2F9原核表达载体的构建和表达
宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹
浙江大学医学院,附属儿童医院血液肿瘤科,浙江,杭州,310003;浙江大学医学院,附属邵逸夫医院,浙江,杭州,310016
Construction and expression of prokaryotic vector of single chain antibody derived from a new clone of anti-CD14 antibody ZCH-7-2F9
 全文: PDF(588 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:构建ZCH-7-2F9(简称2F9)单链抗体(ScFv2F9)原核表达载体,获得活性目的蛋白,为2F9免疫毒素及其它类型的基因工程抗体的研究奠定基础.方法:根据VH2F9、VL2F9、(G4S)3基因序列以及pIVEX2.3-MCS空载体多克隆位点内切酶位点NdeI和SmaI的核酸序列设计引物,采用高保真的Taq酶,通过重叠延伸拚接法(splicing by overlap extension,SOE)扩增克隆到ScFv2F9基因,T-A克隆、测序核实后克隆到pIVEX2.3-MCS空载体中,阳性重组质粒转化大肠杆菌菌株E.coli BL21star(DE3)plysS,IPTG诱导目的蛋白表达,镍树脂纯化后体外复性浓缩,流式细胞术观察其识别和结合CD14的能力.结果:成功构建ScFv2F9的原核表达载体pIVEX2.3-MCS/ScFv2F9;对大肠杆菌的包涵体进行纯化复性,其复性率为32.6;;通过流式细胞术观察到复性ScFv2F9对亲本单抗2F9-FITC有部分的阻滞效果,复性ScFv2F9阻滞1次后阳性细胞百分数、平均荧光强度(MFI)和高峰频道(peakCh)分别下降了11.73;、11.96;和31.57;,阻滞2次后分别下降了26.44;、21.75;和42.11;.结论:ScFv2F9在原核细胞中获得成功表达,复性后目的蛋白对人CD14有一定的识别和结合能力,为2F9单抗的进一步改造打下了坚实的基础.

关键词： 抗原,CD14/免疫学;  原核细胞;  大肠杆菌;  重组,遗传;  抗体,单克隆;  流式细胞术;  质粒;  基因表达    
出版日期: 2008-01-25
基金资助:

国家自然科学基金(30170391);浙江省自然科学基金(Y206009);浙江大学校科研和教改项目(542918)
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宁铂涛
汤永民
曹江
沈红强
钱柏芹

引用本文:

宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹. 鼠抗人CD14单链抗体ScFv2F9原核表达载体的构建和表达[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2008, 37(1): 51-59.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2008/V37/I1/51

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