目的:研究端粒结合因子-1(TRF1)丝氨酸219位磷酸化对细胞周期的影响.方法:突变TRF1的219位氨基酸,构建模拟磷酸化和非磷酸化状态的突变体TRF1S219D-GFP和TRF1S219A-GFP,核苷酸测序和免疫印迹验证目的基因序列及蛋白表达.将野生型和突变体质粒用脂质体转染法转入HeLa细胞,观察它们在细胞中的定位、流式细胞仪检测各细胞周期的细胞数量、免疫印迹检测转染后ATM蛋白水平的改变.结果:测序证实突变成功,GFP抗体免疫印迹证实了突变体的蛋白表达.荧光显微镜下观察到TRF1S219A-GFP和TRF1S219D-GFP均呈点状定位于细胞端粒.流式细胞仪结果显示,过表达野生型和非磷酸化突变体的HeLa细胞产生G2/M期的阻滞(P<0.05).转染野生型和突变体后HeLa细胞中ATM蛋白含量均比对照组增高.结论:ATM激酶对TRF1丝氨酸219位的磷酸化可以抑制由于TRF1过量表达而引起的细胞周期G2/M期的阻滞.
国家重点基础研究发展计划(973计划)(2002CB713700);国家自然科学基金(39870339)
徐熠熠;蓝建平;朱园园;余建;来晓喻;孙洁;黄河. TRF1 219位磷酸化在细胞周期调控中的作用研究[J]. 浙江大学学报(医学版), 2007, 36(4): 325-330.
https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2007/V36/I4/325
Cited