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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2007, Vol. 36 Issue (6): 581-587    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2007.06.011
原著     
乙酰肝素酶基因siRNA表达载体的构建及其沉寂作用
刘晓艳;方红;羊正纲;张好;阮黎明;蒋筱凌
浙江大学医学院,附属第一医院,皮肤科,浙江,杭州,310003;浙江大学医学院,附属第一医院,传染病研究所,浙江,杭州,310003
Construction of heparanase gene-targeted small interfering RNA and its gene silencing effect
 全文: PDF(488 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:构建针对人乙酰肝素酶(HPSE)基因的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对HPSE基因的干扰作用.方法:设计HPSE靶向的发夹状siRNA,合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pRNATU6.1载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人恶性黑素瘤细胞A375,采用半定量PCR测定HPSE基因RNA水平变化,Western blot检测HPSE蛋白表达的变化.结果:将针对HPSE基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pRNATU6.1载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染A375细胞后,半定量PCR和Western blot检测显示,HPSE基因和蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05).结论:成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制HPSE的表达.

关键词： 寡核苷酸类,反义;  葡糖醛酸糖苷酶;  RNA,小分子干扰;  RNA干扰;  乙酰肝素酶;  基因表达;  黑色素瘤    
出版日期: 2007-11-25
基金资助:

浙江省教育厅资助项目(20051085)
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刘晓艳
方红
羊正纲
张好
阮黎明
蒋筱凌

引用本文:

刘晓艳;方红;羊正纲;张好;阮黎明;蒋筱凌. 乙酰肝素酶基因siRNA表达载体的构建及其沉寂作用[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2007, 36(6): 581-587.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2007/V36/I6/581

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