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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2005, Vol. 34 Issue (1): 33-37    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.007
专题报道     
问号钩端螺旋体属lipL32/1-ompL1/1融合基因的真核表达及其表达产物的免疫反应性
严杰;钊守凤;毛亚飞;阮萍;罗依惠;李淑萍;李立伟
浙江大学医学院,病原生物学教研室,浙江,杭州,310031;绍兴文理学院医学院,浙江,绍兴,312000
Eukaryotic expression of Leptospira interrogans lipL32/1-ompL1/1 fusion gene encoding genus-specific protein antigens and the immunoreactivity of expression products
 全文: PDF(347 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)的融合基因lipL32/1-ompL1/1真核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性.方法:采用连接引物PCR构建融合基因lipL32/1-ompL1/1,克隆测序后构建lipL32/1-ompL1/1的毕赤酵母真核表达系统pPIC9K-lipL32/1-ompL1/1-P.pastorisGS115.用MM和MD平板分离His+ Mut+型菌落,YPD平板筛选出G418高抗性的His+ Mut+ 转化子.以酵母裂解酶处理的高拷贝转化子His+ Mut+克隆裂解产物为模板,5'AOX1和3'AOX1为引物,用PCR检测所构建的毕赤酵母工程菌株染色体DNA中的目的融合基因.在BMMY培养基中用甲醇诱导目的重组蛋白rLipL32/1-rOmpL1/1表达.采用硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析提纯培养物上清液中的rLipL32/1-rOmpL1/1.采用SDS-PAGE和Western blot分别检测rLipL32/1-rOmpL1/1的产量及其免疫反应性.结果:获得的lipL32/1-ompL1/1融合基因约为1 794 bp.其核苷酸和氨基酸序列与原始lipL32/1和ompL1/1基因型比较,相似性分别高达99.94;和100;.所构建的真核表达系统可分泌rLipL32/1-rOmpL1/1,SDS-PAGE后位于预期位置处,产量约占上清总蛋白的40;.rLipL32/1和rOmpL1/1兔抗血清均能与表达的rLipL32/1-rOmpL1/1结合.结论:本研究成功地构建了钩体lipL32/1-ompL1/1融合基因高效毕赤酵母真核表达系统,所表达的融合蛋白具有特异的免疫反应性,可作为研制钩体新疫苗的候选抗原.
关键词： 钩端螺旋体,问号;  lipL32/1基因;  ompL1/1基因;  序列同源性,核酸;  序列同源性,氨基酸;  真核表达;  克隆,分子;  lipL32/1-ompL1/1融合基因/免疫学    
出版日期: 2005-01-25
基金资助:

国家自然科学基金(39970678)
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严杰
钊守凤
毛亚飞
阮萍
罗依惠
李淑萍
李立伟

引用本文:

严杰;钊守凤;毛亚飞;阮萍;罗依惠;李淑萍;李立伟. 问号钩端螺旋体属lipL32/1-ompL1/1融合基因的真核表达及其表达产物的免疫反应性[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2005, 34(1): 33-37.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2005/V34/I1/33

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