目的: 原核表达大肠癌相关基因ST13,并予以鉴定.方法:将ST13 cDNA经PCR扩增和亚克隆,与GST原核表达载体pGEX-4T-2重组,转化E.coli INVαF′菌表达,经Gluta th ione Sepharose 4B亲和层析GST-ST13融合蛋白,再以凝血酶切得到ST13蛋白.结果:限制性酶切和DNA测序表明,ST13cDNA ORF正确克隆于pGEX-4T-2多克隆位点 .经IPTG诱导表达的GST-ST13融合蛋白主要存在于可溶性上清,表达量占大肠杆菌总蛋白2 0;.经亲和层析,每升诱导菌回收融合蛋白2.5 mg,纯度为91.3;.Western-blot证实, 原核表达的ST13蛋白、细胞中天然ST13蛋白的10;SDS-PAGE表观分子量,约50 kD.结论:成功构建了ST13基因原核表达质粒,并大量表达和纯化了ST13蛋白.
国家科技攻关项目(96909121)
邵吉民;郑树;耿礼仪. 大肠癌相关基因ST13的原核表达及鉴定[J]. 浙江大学学报(医学版), 2001, 30(6): 252-255.
https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2001/V30/I6/252
Cited