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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2013, Vol. 42 Issue (5): 486-491    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2013.05.002
专题报道     
TcpC通过促进活性氧的产生诱导巨噬细胞凋亡
张大勇，林仪茜，何非，方洁，张翀，王宝明，潘建平
浙江大学城市学院医学院，浙江 杭州 310015
TcpC induces apoptosis of macrophages through promoting ROS production
ZHANG Da-Yong, LIN Yi-Qian, HE Fei, FANG Jie, ZHANG Chong, WANG Bao-Ming, PAN Jian-Ping
Department of Medicine，Zhejiang University City College School of Medicine，Hangzhou 310015，China
 全文: PDF(2580 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的：研究含有Toll/interleukin 1 receptor结构域的蛋白（TcpC）对巨噬细胞凋亡的影响，探讨TcpC诱导巨噬细胞凋亡的分子机制。
方法：通过Transwell 将分泌TcpC的尿路致病大肠埃希菌CFT073野生株（TcpCwt）和敲除tcpc基因的CFT073突变株（TcpCmut）与小鼠巨噬细胞系J774A隔开共培养，Annexin V/PI双染法观察不同数量和不同处理时间的TcpCwt和TcpCmut对J774A细胞凋亡的影响；活性氧染色观察不同处理时间的TcpCwt和TcpCmut对J774A细胞内活性氧水平的影响，Annexin V/PI双染法观察不同浓度N-乙酰半胱氨酸清除活性氧后TcpCwt和TcpCmut对J774A细胞凋亡的影响，Western blot法检测0.1 mmol N-乙酰半胱氨酸处理前后与TcpCwt和TcpCmut共培养的J774A细胞内caspase-3表达。
结果：与对照组和TcpCmut组相比，TcpCwt在细菌数量为5×105和5×106以及处理时间为24 h和36 h时均可显著促进J774A凋亡（均P<0.01）。共培养24 h和36 h的TcpCwt组J774A细胞内活性氧水平显著高于对照组和TcpCmut组（均P<0.01）。0.1 mmol和1 mmol N-乙酰半胱氨酸处理可显著抑制TcpCwt对J774A细胞的促凋亡作用（均P<0.01）。TcpCwt处理可显著降低J774A细胞内总caspase-3表达，而N-乙酰半胱氨酸处理可抑制与TcpCwt共培养的J774A细胞内caspase-3裂解，提高总caspase-3表达水平。
结论：TcpC可促进巨噬细胞内活性氧产生，进而介导巨噬细胞凋亡。
关键词： 肠致病性大肠杆菌;  巨噬细胞;  活性氧;  细胞凋亡;  小鼠;  基因敲除;  细胞;  培养的    
Abstract:
Objective： To investigate the effects of Toll/interleukin 1 receptor domain-containing protein（TcpC）on macrophages and its mechanisms.
Methods： Murine macrophage J774A cells were co-cultured with TcpC producing wild type E. coli strain CFT073 (TcpCwt) or tcpc gene-deleted CFT073 mutant (TcpCmut) in Transwell system，respectively. Apoptosis of J774A cells co-cultured with TcpCwt or TcpCmut was analyzed by Annexin/PI double staining. The levels of reactive oxygen species (ROS) in J774A cells were determined by DCFH-DA staining after treatment with TcpCwt or TcpCmut at 6 h，12 h，24 h or 36 h. After the ROS was scavenged by N-acetylcysteine (NAC)，the changes of J774A cell apoptosis were also examined. The expression of caspase-3 in J774A cells co-cultured with TcpCwt or TcpCmut in the presence or absence of 0.1 mmol NAC was detected by Western blot.
Results： J774A cells co-cultured with TcpCwt for 24 h or 36 h showed significantly increased apoptosis (27.39%±4.05% and 28.45%±4.55%，respectively) when compared to control group (7.96%±1.63% and 10.55%±1.44%，P<0.01) or TcpCmut group (11.45%±2.77% and 19.26%±2.89%，P<0.01）. Levels of ROS in J774A cells treated with TcpCwt for 24 h (108.8±9.73) or 36 h (100.3±10.11) were significantly higher than those in control group (56.8±4.11 and 52.8±4.42，P<0.01) or TcpCmut (69.7±5.66 and 62.6±4.56，P<0.01). The pro-apoptotic effects of TcpCwt on J774A cells were reversed by 0.1 or 1 mMol NAC treatment. Expression of caspase-3 in J774A cells co-cultured with TcpCwt (0.43±0.04) decreased significantly when compared to control group (0.75±0.08，P<0.05) or TcpCmut group (0.80±0.12，P<0.05). However，total caspase-3 expression was restored in J774A cells co-cultured with TcpCwt in the presence of 0.1 mmol NAC (0.80±0.09).
Conclusion： TcpC can promote ROS production in macrophages，hereby inducing macrophage apoptosis.
Key words: Enteropathogenic Escherichia coli    Macrophages    Reactive oxygen species    Apoptosis    Mice, Knockout    Cells, Cultured
收稿日期: 2013-06-14 出版日期: 2013-09-25
:  R 742.1  
基金资助:

浙江省医药卫生科技计划（2013KYA149）；浙江大学城市学院大学生科研项目（XZ2013562106）
通讯作者: 潘建平（1962-），男，博士，教授，博士生导师，主要从事免疫学研究     E-mail: jppan@zucc.edu.cn
作者简介: 张大勇（1978-），男，博士，讲师，主要从事细胞衰老及凋亡机制研究；E-mail:zhangdy@zucc.edu.cn
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引用本文:

张大勇, 林仪茜, 何非, 方洁, 张翀, 王宝明, 潘建平. TcpC通过促进活性氧的产生诱导巨噬细胞凋亡[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2013, 42(5): 486-491.

ZHANG Da-Yong, LIN Yi-Qian, HE Fei, FANG Jie, ZHANG Chong, WANG Bao-Ming, PAN Jian-Ping. TcpC induces apoptosis of macrophages through promoting ROS production. Journal of ZheJiang University(Medical Science), 2013, 42(5): 486-491.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/10.3785/j.issn.1008-9292.2013.05.002    或    https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2013/V42/I5/486

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