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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2012, Vol. 41 Issue (4): 381-385    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2012.04.005
专题报道     

建立经优化的促P19鼠胚胎癌细胞神经分化模型
梅宇钦1，梁星光1，2，楼宜嘉1，俞永平3，朱丹雁1
1.浙江大学药学院 心脑血管与肝脏药理研究室，浙江 杭州 310058； 2.浙江大学医学院附属第一医院药剂科，浙江 杭州 310003； 3.浙江大学药学院药物研究所，浙江 杭州 310058
Establishment of optimized neuronal differentiation-promoting model derived from P19 embryonic carcinoma cells

MEI Yu-qin1, LIANG Xing-guang1,2, LOU Yi-jia1, YU Yong-ping3, ZHU Dan-yan1
1.Division of Cardio-Cerebral Vascular and Hepatic Pharmacology, College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China; 2.Department of Pharmacy, The First Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, China; 3. Institute of Materia Medica, College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, China
 全文: PDF(2488 KB)   HTML ( ) 
摘要： 目的：建立P19胚胎癌细胞（embryonal carcinoma cells，EC）定向分化为神经样细胞体外模型，用于快速初步确定小分子化合物促神经发生活性。
方法：采用单因素变量法进行培养条件探索，考察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid，RA）浓度、悬浮天数、贴壁细胞密度和贴壁后培养液选择对分化的影响。4 d后形成的拟胚体经胰蛋白酶消化为单细胞，并建立分阶段确定评价指标，适用于不同时相评价。光镜观察细胞表型，神经元特异蛋白β-tubulin Ⅲ免疫荧光染色加以确认。
结果：P19细胞悬浮培养4 d，加入RA（终浓度1 μmol/L）。以单细胞悬液在1.2×106/ml密度贴壁培养为最佳条件。光镜观察在第8天即有神经元样细胞表型，在第16天可形成神经元样网状结构，两个评价时间点免疫荧光染色均呈β-tubulin Ⅲ阳性，并与光镜表型相一致。
结论：P19细胞分化为神经元样表型，为小分子促神经分化初级筛选提供模型。
关键词： 胚胎性癌干细胞;  神经再生;  P19胚胎癌细胞;  维甲酸;  神经分化;  表型筛选;  体外模型    
Abstract: Objective： To establish an optimized primary drug screen model of neuronal differentiation using P19 embryonal carcinoma cells.
Methods： The final concentration of retinoid acid (RA), days of suspension culture, manner of adherent culture, suitable cell density and adherent culture medium were tested, respectively. Two stages of neuronal differentiation were examined based on morphological changes and immunocytochemistry analysis of neuronal specific protein β-tubulin Ⅲ.
Results： On d 8 of differentiation culture, neuron-like cells were observed with final concentration of 1 μmol/L RA. Neuron-like network was formed on d 16 of neuronal differentiation. β-tubulin Ⅲ was positively stained on both stages, indicating P19 cells were differentiated into neurons.
Conclusion： The model using RA to induce P19 embryonic carcinoma cells to differentiate into neuron-like cells has been successfully established, which may provide a rapid, phenotypic cell-based platform for primary screening of neurogenesis-promoting drugs.
Key words: Embryonal carcinoma stem cells    Nerve regeneration    P19 embryonal carcinoma cells    Retinoic acid    Neuronal differentiation    Phenotypic screening    In vitro model
出版日期: 2012-07-25
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引用本文:

梅宇钦;梁星光;楼宜嘉;俞永平;朱丹雁.
建立经优化的促P19鼠胚胎癌细胞神经分化模型[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2012, 41(4): 381-385.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2012/V41/I4/381

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