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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2005, Vol. 34 Issue (1): 48-54    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.010
原著     
小鼠ACE2基因的克隆和体外表达以及序列分析与组织分布
谢旭东;陈君柱;王兴祥;朱建华;孙坚;陶明;尚云鹏;郭晓纲
浙江大学医学院,附属第一医院心内科,浙江,杭州,310003;中国科学院生物信息学研究所北京华大基因中心,北京,101300
Cloning, expression and sequence analysis and tissue distribution of angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) gene in adult mice
 全文: PDF(355 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:深入研究血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)在心血管疾病发病机理中的作用及在高血压基因治疗中的应用,克隆和体外表达小鼠ACE2基因,并进行核苷酸和氨基酸序列分析和组织分布特征研究.方法:采用RT-PCR方法,从小鼠肾组织中扩增出ACE2基因的全长cDNA序列,TA克隆到pGEM-T easy载体,亚克隆到pcDNA3.1+载体,构建重组真核表达质粒pmACE2,测序鉴定.采用脂质体法将pmACE2转染Cos7细胞,分别用RT-PCR和SDS-PAGE检测ACE2的转录和表达.CLUSTALX 1.8生物软件分析小鼠和大鼠及人ACE2蛋白的多序列比较.采用RT-PCR技术研究小鼠ACE2组织分布的特异性.结果:①RT-PCR扩增片段约2.6 kb,重组真核表达质粒pmACE2测序结果表明,克隆片段存在A701G、T1102C和T1330C 3处变异,其序列与以往报道不一致,cDNA全长为2 397 bp,而与NCBI Refseq数据库(XM-136130)中cDNA全长1 902 bp不符;②SDS-PAGE显示pmACE2表达产物的相对分子量约80 kD;③氨基酸序列分析表明,小鼠ACE2主要由N末端的信号肽序列(第1-18位残氨)、含有锌结合位点保守序列HHEMGHIQ(第373-380位残氨)的催化结构域和跨膜结构域(第738-765位残氨)组成;④小鼠ACE2与人有84;的相似性,与大鼠有90;的相似性,三者同源;⑤ACE2在肺、心和肾组织中大量表达,在睾丸和肝组织中也有表达.结论:成功克隆并体外表达了小鼠ACE2基因,不同物种ACE2组织分布的特异性不尽相同.
关键词： 血管紧张素转化酶2;  克隆,分子;  基因表达;  序列分析;  Cos7细胞    
出版日期: 2005-01-25
基金资助:

浙江省科技厅资助项目(021107613);浙江省卫生厅资助项目(2003A043)
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谢旭东
陈君柱
王兴祥
朱建华
孙坚
陶明
尚云鹏
郭晓纲

引用本文:

谢旭东;陈君柱;王兴祥;朱建华;孙坚;陶明;尚云鹏;郭晓纲. 小鼠ACE2基因的克隆和体外表达以及序列分析与组织分布[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2005, 34(1): 48-54.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2005/V34/I1/48

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