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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2013, Vol. 42 Issue (2): 184-191    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2013.02.009
论著     
磷脂酶C分子在结核分枝杆菌触发树突状细胞细胞骨架重排中的作用
徐水凌1，徐妍2，黄佳1，范宏彦1，金梦媚1
1.嘉兴学院医学院 病原生物学教研室，浙江 嘉兴 314001；
2.遵义医学院·珠海校区，广东 珠海 519041
Role of phospholipase C in cytoskeleton rearrangements of dendritic cells invaded by Mycobacterium tuberculosis
XU Shui-Ling1, XU Yan2, HUANG Jia1, FAN Hong-Yan1, JIN Meng-Mei1
Medical School of Jiaxing College，Jiaxing 314001，China
 全文: PDF(1679 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的：研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）侵入小鼠树突状细胞株（DC2.4）时细胞骨架微丝、微管变化及其与磷脂酶C（PLC）分子的关系。
方法：建立人结核分枝杆菌H37Rv株DC2.4细胞混合培养模型。采用罗丹明标记的鬼笔环肽（Palloidin-TRITC）染细胞F-actin，用抗微管蛋白β亚单位的小鼠一抗和荧光素标记的兔抗小鼠二抗染细胞微管，检测H37Rv株侵入DC2.4细胞时细胞骨架的变化情况，并计算F-actin重排率。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测DC2.4细胞浆和细胞膜中PLC分子的表达。采用PLC分子抑制剂U73122预处理DC2.4细胞，观察H37Rv株侵入率变化以及对细胞骨架变化的影响。
结果：结核分枝杆菌H37Rv株与DC2.4细胞共育2 h，即见有细菌侵入，共育4、6、8、10、12 h后，H37Rv侵入率分别为（26.1±4.5）%、（39.9±5.6）%、（51.2±5.9）%、（57.9±6.1）%和（63.9±6.8）%；H37Rv侵入2、4、6、8、10、12 h时，F-actin重排百分率分别为（26.9±1.5）%、（59.3±2.8）%、（72.7±4.8）%、（78.2±5.9）%、（63.3±2.9）%和（43.2±2.6）%，而PLC信号分子阻断后，DC2.4细胞的侵入率则分别为（13.6±3.1）%、（14.2±3.9）%、（15.1±4.3）%、（16.8±4.0）%和（18.3±5.2）%，F-actin重排率也分别为（18.5±1.2）%、（22.3±1.7）%、（23.6±2.5）%、（24.8±2.3）%、（22.3±1.3）%和（23.8±1.8）%，而微管变化不大；混合培养4、6、8、10 h，PLC信号通路阻断前的侵入率和F-actin重排率明显高于PLC分子阻断后（P＜0.05）。侵入2 h后，DC2.4细胞膜中的PLC分子表达即开始升高，至8 h时达最高；U73122可抑制DC2.4细胞膜中PLC分子的表达，而对细胞浆中的PLC分子影响不大。
结论：结核分枝杆菌可通过激活DC2.4细胞PLC分子触发F-actin细胞骨架重排，从而侵入DC2.4细胞，且PLC分子的表达主要存在于DC2.4细胞膜上。
关键词： 分枝杆菌;  结核;  树突细胞/细胞学;  C型磷脂酶类;  细胞骨架/超微结构;  基因重排;  小鼠树突状细胞;  细胞骨架;  重排;  磷脂酶C    
Abstract:

Objective： To investigate the role of phospholipase C(PLC）in cytoskeleton rearrangement of mouse dendritic cells invaded by Mycobacterium tuberculosis.
Methods： Mouse dendritic DC2.4 cells were co-cultured with Mycobacterium tuberculosis H37Rv.F-actin of DC2.4 cells were strained with palloidin-TRITC，the microtubule was stained with anti-β-tubulin monoclonal antibody and FITC-conjugated affnipure anti-mouse IgG.The changes of cytoskeleton in DC2.4 cells induced by Mycobacterium tuberculosis H37Rv were determined by fluorescence microscopy and the rates of F-actin rearrangements were calculated.The expressions of PLC in cytoplasm and cytomemberane of DC2.4 cells were measured by ELISA.DC2.4 cells were pretreated with PLC inhibitor U73122，then F-actin rearrangements induced by invasion of Mycobacterium tuberculosis were observed.
Results： Bacterial invasion was observed while DC2.4 cells were co-incubated with Mycobacterium tuberculosis H37Rv for 2 h.The rates of invasion were（26.1±4.5）%,（39.9±5.6）%,（51.2±5.9）%,（57.9±6.1）% and（63.9±6.8）% at 4，6，8，10 and 12 h of co-culture，respectively; while those were（13.6±3.1）%,（14.2±3.9）%,（15.1±4.3）%,（16.8±4.0）% and（18.3±5.2）% after blocked by PLC，respectively.The rates of the F-actin rearrangements at 2，4，6，8，10 and 12 h after DC2.4 cells were invaded by H37Rv were（26.9±1.5）%,（59.3±2.8）%,（72.7±4.8）%,（78.2±5.9）%,（63.3±2.9）% and （43.2±2.6）%，respectively; while those were（18.5±1.2）%,（22.3±1.7）%,（23.6±2.5）%,（24.8±2.3）%,（22.3±1.3）% and （23.8±1.8）% after blocked by PLC，respectively.There were no changes of the microtubule observed in DC2.4 cells at the same time points.The rates of the F-actin rearrangements before blocked by PLC were higher than those after PLC blockade at 4，6，8 and 10 h（P＜0.05）.The expressions of PLC in cytomembrane in DC2.4 cells increased after 2 h and reached its highest level at 8 h.The PLC inhibitor U73122 inhibited the expressions of PCL in cytomembrane of DC2.4 cells，but not in cytoplasm.
Conclusions： Mycobacterium tuberculosis can provoke to F-actin rearrangements through PLC molecule，which would further lead to Mycobacterium tuberculosis invasion of DC2.4 cells.
Key words: Mycobacterium tuberculosis    Dendritic cells/cytology    Type C phospholipases    Cytoskeleton/ultrastructure    Gene rearrangement    Mouse dendritic cell    Cytoskeleton    rearrangement    Phospholipase C
收稿日期: 2012-03-15 出版日期: 2013-03-25
:  R 378.91  
基金资助:

嘉兴市科技计划项目（2011AY1048-2）.
作者简介: 徐水凌（1964-），男，教授，硕士生导师，主要从事细菌分子和细胞致病机制的研究；E-mail：xu.shuiling@mail.zjxu.edu.cn
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徐水凌
徐妍
黄佳
范宏彦
金梦媚

引用本文:

徐水凌, 徐妍, 黄佳, 范宏彦, 金梦媚. 磷脂酶C分子在结核分枝杆菌触发树突状细胞细胞骨架重排中的作用[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2013, 42(2): 184-191.

XU Shui-Ling, XU Yan, HUANG Jia, FAN Hong-Yan, JIN Meng-Mei. Role of phospholipase C in cytoskeleton rearrangements of dendritic cells invaded by Mycobacterium tuberculosis. Journal of ZheJiang University(Medical Science), 2013, 42(2): 184-191.

链接本文:

http://www.zjujournals.com/med/CN/10.3785/j.issn.1008-9292.2013.02.009    或    http://www.zjujournals.com/med/CN/Y2013/V42/I2/184


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