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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2011, Vol. 40 Issue (5): 501-507    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2011.05.007
论著     
Alloferon-1抗生肽串联重组表达及重组Alloferon-1体外抗肿瘤活性
徐小寅1，严杰1，孙琦2
1.浙江大学医学院病原生物学系，浙江 杭州 310058; 2.浙江医学高等专科学校，浙江 杭州 310053
Serial recombinant expression and anti-tumor activity in vitro of antibiotic peptide Alloferon-1
XU Xiao-yin 1,YAN Jie 1,SUN Qi 2
1.Department of Medical Microbiology and Parasitology,Zhejiang University School of Medicine,Hangzhou 310058,China; 2.Department of Laboratory Medicine,Zhejiang Medical College,Hangzhou 310053,China
 全文: PDF(1232 KB)   HTML ( ) 
摘要： 目的：构建含胰蛋白酶酶切位点的Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段及其原核表达系统，了解有赖氨酸尾重组Alloferon-1（rAlloferon-1）体外抗肿瘤活性。
方法：根据Alloferon-1序列不含精氨酸和赖氨酸的特点，构建C端加有含胰蛋白酶酶切位点赖氨酸的14×Alloferon-1抗生肽重复串联DNA片段。采用pET42a表达载体和E.coli BL21DE3表达宿主菌，构建Alloferon-1重复串联DNA片段原核表达系统。SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组产物表达量，Ni-NTA亲和层析、胰蛋白酶酶切和Sephadex G-50层析法提纯14×rAlloferon-1-K及其rAlloferon-1-K单体。BALB/c 小鼠脾细胞分别与K562、KB和SGC肿瘤细胞共培养模，采用CCK-8法检测rAlloferon-1-K、化学合成Alloferon-1 （cAlloferon-1）及Alloferon-1-K（cAlloferon-1-K）体外抑制肿瘤细胞生长及增殖的活性并进行比较。
结果：原核表达系统E.coli BL21DE3pET42a-14×Alloferon-1-K在IPTG诱导下能有效表达14×rAlloferon-1-K蛋白，其产量约为细菌总蛋白的30%。0.1～10 ng/ml的rAlloferon-1-K具有明显提高小鼠脾细胞抑制K562、KB和SGC肿瘤细胞的生长及增殖（P<0.01），rAlloferon-1-K的抗肿瘤活性与cAlloferon-1及cAlloferon-1-K比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：本研究成功构建了Alloferon-1抗生肽重复串联原核表达系统，有效地提高了Alloferon-1产量；而且rAlloferon-1-K仍保持原有的体外抗肿瘤活性。
关键词： 重组融合蛋白质类;  肽类/分离和提纯;  抗菌药/分离和提纯;  抗肿瘤药/药理学;  重组;  遗传;  质粒    
Abstract: Objective： To generate a recombinant expression system of repeated serial antibiotic peptide Alloferon-1 DNA segment with trypsin digestion site and to determine its anti-tumor activity in vitro.
Methods： A 14 repeated serial DNA segment of Alloferon-1 with a lysine residual at the C-end that acts as the trypsin digestion site was constructed.pET42a vector and E.coli BL21DE3 were applied to generate the prokaryotic expression system of the repeated serial DNA segment of Alloferon-1.The yield of target recombinant product was measured by SDS-PAGE and Bio-Rad Gel image system.Ni-NTA affinity column,trypsin digestion and Sephadex G-50 column were used to purify 14 rAlloferon-1-K fusion protein and rAlloferon-1-K monomer.By using the co-cultivation of BALB/c mouse splenocyte with K562,KB or SGC tumor cells and CCK-8 detection method,the effects of rAlloferon-1-K,chemosynthetic Alloferon-1 (cAlloferon-1) and Alloferon-1-K (cAlloferon-1-K) on the growth and proliferation of tumor cells were detected.
Results： The prokaryotic expression system E.coli BL21DE3pET42a-14 Alloferon-1-K efficiently expressed 14 rAlloferon-1-K fusion protein under inducement of IPTG,and the yield of fusion protein was approximate 30% of the total bacterial proteins.0.1~10 ng/ml rAlloferon-1-K remarkably increased the effect of mouse splenocytes to inhibit the growth and proliferation of K562,KB and SGC cells (P<0.05),and there was no statistically significant difference of the anti-tumor ability of rAlloferon-1-K compared to that of cAlloferon-1 or cAlloferon-1-K (P>0.05).
Conclusion： A prokaryotic expression system of repeated serial Alloferon-1 DNA segment has been successfully constructed with high yield of rAlloferon-1-K,which maintains anti-tumor activity in vitro.
Key words: Recombinant fusion proteins    Peptides/isol    Anti-bacterial agents/isol    Antineoplastic agents/pharmacol    Recombination,genetic    Plasmids
出版日期: 2011-09-25
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徐小寅;严杰;孙琦. Alloferon-1抗生肽串联重组表达及重组Alloferon-1体外抗肿瘤活性[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2011, 40(5): 501-507.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2011/V40/I5/501

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