Please wait a minute...
浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2011, Vol. 40 Issue (3): 297-303    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2011.03.012
论著     
密码子优化提高重组金葡菌肠毒素O在大肠杆菌中的表达水平
黄鹏，孙红颖，陈枢青
浙江大学药学院药物毒理与生化药学研究所,浙江 杭州 310058
Codon optimization of recombinant staphylococcal enterotoxin O enhances the expression level in Escherichia coli
HUANG Peng,SUN Hong-ying,CHEN Shu-qing
Institute of Pharmacology,Toxicology and Biological Pharmaceutics,College of Pharmaceutical Sciences,Zhejiang University,Hangzhou,310058,China
 全文: PDF(1723 KB)   HTML ( ) 
摘要： 目的：优化稀有密码子提高重组肠毒素O的表达量。
方法：将带His标签的肠毒素O成熟肽克隆至pET28a质粒上，采用PCR方法对15个稀有密码子进行突变，将突变后的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)，并进行蛋白表达及活性鉴定。
结果：通过稀有密码子优化，重组肠毒素O的表达量由菌液总蛋白的7.49%提高至19.8%；小鼠淋巴细胞增殖试验表明，通过密码子优化的肠毒素O具有刺激淋巴细胞增殖的作用，并且其增殖作用与未优化前的肠毒素O相当。
结论：稀有密码子优化能够有效增加肠毒素O的表达量。
关键词： 葡萄球菌;  金黄色/免疫学;  肠毒素类/免疫学;  密码子;  基因表达;  遗传载体;  质粒;  突变;  细胞增殖;  淋巴细胞    
Abstract: Objective： To enhance the expression level of staphylococcal enterotoxin O（SEO） by optimization of rare codons.
Methods： The gene of mature SEO (His-tag included) was cloned to pET28a,and 15 rare codons on the gene were optimized by PCR technology.These recombinant plasmids then were transformed into E.coli BL21(DE3),respectively.After IPTG induced,the expression levels of those mutants were analyzed by SDS-PAGE.The proteins were purified and their bioactivities were determined.
Results： After the optimization of rare codons,the expression levels were increased from 7.49% to 19.8% in total cell proteins.The optimized SEO had bioactivity to stimulate the proliferation of murine lymphocytes,which was equivalent to that of non-optimized SEO in vitro.
Conclusion： Optimization of rare codons can enhance the expression of SEO effectually.
Key words: Staphylococcus aureus/immunol    Enterotoxins/immunol    Codon    Gene expression    Genetic vectors    Plasmids    Mutation    Cell proliferation    Lymphocytes
出版日期: 2011-05-25
服务　　
把本文推荐给朋友
加入引用管理器
E-mail Alert
RSS
作者相关文章　　

引用本文:

黄鹏;孙红颖;陈枢青. 密码子优化提高重组金葡菌肠毒素O在大肠杆菌中的表达水平[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2011, 40(3): 297-303.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2011/V40/I3/297

[1] 上官华坤,徐源彬,陈瑞敏. 12例努南综合征患儿的临床特征及重组人生长激素疗效观察[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2021, 50(4): 500-505.
[2] 王杰,朱博,张丽春,赵一桐,王晓华,贾跃旗. 苯丙氨酸羟化酶基因c.158G>A(p.Arg53His)突变患儿随访及突变位点功能评估[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2021, 50(4): 444-453.
[3] 杨池菊,史彩虹,周成,万秋花,周艳彬,陈西贵,靳宪莲,黄成刚,徐鹏. 山东省济宁地区新生儿脂肪酸氧化代谢病筛查及随访分析[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2021, 50(4): 472-480.
[4] 严坤宁,张婷,查艺闻,梁景岩,成勇. 运用CRISPR/Cas9技术构建PCSK9点突变家兔模型[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2021, 50(2): 229-238.
[5] 邵一鸣,苏力德,郝睿,王茜茜,那仁满都拉. 乙型肝炎病毒诱发肝细胞癌分子机制研究进展[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2021, 50(1): 113-122.
[6] 楼招欢,赵华军,吕圭源. “肺与大肠相表里”的黏膜免疫调节机制及中药干预作用研究进展[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2020, 49(6): 665-678.
[7] 严敏,汪旭,郭锡汉. 早老蛋白1功能缺失性突变导致家族性阿尔茨海默病的研究进展[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2020, 49(4): 487-499.
[8] 欧伟杰,林苏,吴奕隆,朱月永. UGT1A1基因复合杂合突变致吉尔伯特综合征一例[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2020, 49(3): 406-409.
[9] 宛昱君,刘君妍,王妤婷,成小雨,沙莎,贾婉莹,胡德邻,李昕宇,郭凤. 钙调蛋白及其突变体与电压门控钠离子通道1.2异亮氨酸-谷氨酰胺基序的结合作用[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2020, 49(1): 71-75.
[10] 徐亦鸣,应可净. 中性粒细胞胞外诱捕网与肿瘤相关研究进展[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2020, 49(1): 107-112.
[11] 方娟,潘志成,郭晓纲. INK4基因座中反义非编码RNA调控细胞增殖与凋亡影响动脉粥样硬化的研究进展[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2020, 49(1): 113-117.
[12] 潘宗富,胡晓平,张轶雯,李莉,黄萍. 缺血性脑损伤大鼠外周血动态共表达网络分析[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2019, 48(6): 587-593.
[13] 米爽,吴燕君,洪正华,王章富,冯兴兵,郑光彬. TLR4/MyD88/NF-κB通路基因及相关炎症因子在继发性脊髓损伤患者中的表达[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2019, 48(6): 609-616.
[14] 刘蓓,杨艳梅,严恺,陈敏,王丽雅,黄颖之,钱叶青,董旻岳. Ⅰ型神经纤维瘤一家系的基因检测及产前诊断[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2019, 48(4): 367-372.
[15] 楼铁,黄颖之,董旻岳. CLN6基因复合杂合突变导致神经元蜡样脂褐质沉积症一家系遗传学研究[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2019, 48(4): 373-377.