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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2007, Vol. 36 Issue (4): 348-354    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2007.04.007
原著     
抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析
宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹
浙江大学医学院,附属儿童医院血液肿瘤科,浙江,杭州,310003
Cloning and sequencing of VL and VH genes from a novel clone ZCH-7-2F9 of anti-hCD14 monoclonal antibody
 全文: PDF(465 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:获取抗人CD14单克隆抗体(单抗)ZCH-7-2F9(简称2F9)轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,为2F9单链抗体(ScFv2F9)的构建奠定基础.方法:复苏2F9和NS-1细胞株,并亚克隆2F9细胞株,从其最佳克隆93A10提取总RNA,RQ1 Rnase-Free Dnase处理污染的DNA,与NS-1细胞进行同步对照,通过RT-PCR,扩增获得2F9单抗VL基因和VH基因,分别克隆入pGEM(R)-T Easy载体,然后转化DH5α细菌,酶切鉴定并纯化阳性重组子,测序后进行在线核苷酸序列分析.结果:2F9单抗VL基因全长321 bp,编码107个氨基酸,归属于小鼠Ig的Vκ基因,氨基酸序列分析结果显示,VL含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR),在第23位和第88位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸;其VH基因全长360 bp,编码120个氨基酸,归属于小鼠Ig的VH基因,氨基酸序列分析结果显示,VH含有明确的4个框架区和3个抗原决定簇互补区,在第22位和第96位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸.结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别是2F9单抗的VL和VH基因,为2F9基因工程抗体研究奠定了坚实的基础.
关键词： 抗体,单克隆;  抗原,CD14;  序列分析;  免疫球蛋白可变区/遗传学;  基因    
出版日期: 2007-07-25
基金资助:

国家自然科学基金(30170391);浙江省自然科学基金(Y206009);浙江大学校科研和教改项目(542918)
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宁铂涛
汤永民
曹江
沈红强
钱柏芹

引用本文:

宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹. 抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2007, 36(4): 348-354.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2007/V36/I4/348

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