目的:研究p53N端缺失突变体(301-393氨基酸)的绿色荧光融合蛋白p53301-393-GFP在p53阳性和阴性细胞中的定位以及对有丝分裂的影响.方法:免疫印迹检测突变体融合蛋白的表达.将野生型p53-GFP和p53301-393-GFP质粒,分别转染p53阳性细胞株HeLa和p53阴性细胞株H1299,观察各融合蛋白的细胞定位.观察转染突变体后H1299细胞生长情况,计数有丝分裂期的细胞数.HeLa细胞转染突变体后,流式细胞仪检测细胞周期,免疫印迹检测p53蛋白水平的改变.结果:p53301-393-GFP融合蛋白能正确表达.突变体在p53阳性和阴性细胞中都弥散定位于细胞核,但只在p53阳性细胞中才定位于核仁.p53301-393-GFP融合蛋白对H1299细胞的有丝分裂有明显的抑制作用,使进入有丝分裂期的细胞数量明显较对照组减少,且能够诱导凋亡.转染突变体的HeLa细胞产生G2/M期阻滞(P<0.05),但是内源性p53蛋白水平无明显改变.结论:p53301-393-GFP突变体在p53阳性和阴性细胞中有不同的细胞定位,并能抑制细胞的有丝分裂,使细胞发生G2/M期阻滞.
国家重点基础研究发展计划(973计划)(2002CB713700);国家自然科学基金(39870339)
徐熠熠;蓝建平;朱园园;余建;来晓喻;孙洁;黄河. p53301-393突变体的细胞定位及对有丝分裂的影响[J]. 浙江大学学报(医学版), 2007, 36(4): 331-336.
https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2007/V36/I4/331
Cited