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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2005, Vol. 34 Issue (2): 157-162    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.02.013
原著     
差异显示PCR技术在念珠菌基因表达研究中的应用
朱宇宁;吕时铭
浙江大学医学院,附属妇产科医院,浙江,杭州,310006
Application of differential display-PCR technique in fluconazole-resistance gene expression of Candida
 全文: PDF(323 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:探讨差异显示PCR技术(DD-PCR)在念珠菌基因表达研究中的方法学要点.方法:将临床阴道来源的白色念珠菌氟康唑敏感菌株435体外诱导氟康唑耐药性,于诱导80d得到耐药子代435-2,采用长引物差异扩增、银染显示差异条带、反式点杂交预筛选及非放射性法标记探针的改良的DD-PCR,比较435与435-2在有药及无药培养基中的表达差异.结果:在435-2含药培养组中得到较435-2、435无药培养组表达明显增强的片段N2、N3、N12,分别与数据库中白色念珠菌的醇脱氢酶基因ADH1、拓扑异构酶基因TOP2及多药耐药基因CDR1基因有高度同源性;半定量RT-PCR中证实了ADH1、CDR1基因在耐药株中的高表达.结论:ADH1、CDR1基因的高表达与白色念珠菌氟康唑耐药性形成相关,ADH1可能是新的耐药基因;改良的DD-PCR技术降低了假阳性率的产生,使确证步骤更加便捷,在念珠菌研究领域有很好的应用前景.

关键词： 聚合酶链反应;  差异显示PCR技术;  念珠菌,白色/遗传学;  基因表达;  方法学    
出版日期: 2005-03-25
基金资助:

浙江省自然科学基金 (301546)
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朱宇宁
吕时铭

引用本文:

朱宇宁;吕时铭. 差异显示PCR技术在念珠菌基因表达研究中的应用[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2005, 34(2): 157-162.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2005/V34/I2/157

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