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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2005, Vol. 34 Issue (1): 27-32    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.006
专题报道     
问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及其应用
罗冬娇;严杰;毛亚飞;李淑萍;罗依惠;李立伟
浙江大学医学院,病原生物学教研室,浙江,杭州,310031;杭州师范学院医学院,浙江,杭州,310012;浙江大学医学院,病原生物学教研室,浙江,杭州,310031
Construction and application of prokaryotic expression system of Leptospira interrogans lipL32/1-lipL41/1 fusion gene
 全文: PDF(280 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统,了解钩体野生株lipL32和lipL41基因携带和表达情况及钩体患者的血清抗体水平.方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/1融合基因,常规方法构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达情况.采用Western blot鉴定rLipL32/1- rLipL41/1的免疫原性.采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株lipL32和lipL41基因及其表达情况.采用ELISA检测228例钩体患者血清lipL32和lipL41基因产物的抗体.结果:与报道的相关序列比较,lipL32/1-lipL41/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.9;和99.8;.目的重组蛋白rLipL32/1-rLipL41/1表达产量约为细菌总蛋白的10;,主要以包涵体形式存在.rLipL32/1和rLipL41/1兔抗血清均能与rLipL32/1-rLipL41/1结合.97.9;和87.6;问号钩体野生株分别有lipL32和lipL41基因.95.9;和84.5;问号钩体野生株分别与rLipL32s和rLipL41s兔抗血清出现效价,为1:4～1:128的MAT阳性结果.分别有94.7;～97.4;和78.5;～84.6;患者血清rLipL32s和rLipL41s抗体阳性.结论:本研究成功地构建了lipL32/1-lipL41/1融合基因及其原核表达系统,所表达的产物具有良好的免疫原性.lipL32和lipL41是广泛存在于不同血清群问号钩体并有较高表达率的基因,且其不同基因型的表达产物有交叉抗原性.
关键词： 钩端螺旋体,问号;  lipL32基因;  lipL41基因;  序列同源性,核酸;  序列同源性,氨基酸;  基因表达;  克隆,分子;  lipL32/1-lipL41/1融合基因/免疫学    
出版日期: 2005-01-25
基金资助:

国家自然科学基金(39970678)
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罗冬娇
严杰
毛亚飞
李淑萍
罗依惠
李立伟

引用本文:

罗冬娇;严杰;毛亚飞;李淑萍;罗依惠;李立伟. 问号钩端螺旋体lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及其应用[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2005, 34(1): 27-32.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2005/V34/I1/27

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