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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2005, Vol. 34 Issue (1): 21-26    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.005
专题报道     
rLTB/rCTB-rOmpL1/1融合基因及其原核表达系统的构建和鉴定
阮萍;严杰;毛亚飞;李淑萍;罗依惠;李立伟
浙江大学医学院,病原生物学教研室,浙江,杭州,310031;绍兴文理学院医学院,浙江,绍兴,312000;浙江大学医学院,病原生物学教研室,浙江,杭州,310031
Construction and identification of the prokaryotic expression system of rLTB/rCTB-rOmpL1/1 fusion genes
 全文: PDF(280 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:构建ltB/ctB-ompL1/1融合基因及其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫和佐剂活性,检测问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株ompL1基因的携带和表达情况及钩体患者血清特异性抗体水平.方法:采用连接引物PCR构建ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因,常规方法构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE、Western blot和GM1-ELISA分别检测目的重组蛋白rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1表达量、免疫反应性及与GM1结合的活性.采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株ompL1基因及其表达情况.采用ELISA检测228例钩体患者血清ompL1基因产物的抗体.结果:与报道的相关序列比较,ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性,分别为99.7;～99.9;和99.5;～100;.rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1表达产量均约为细菌总蛋白的10;,主要以包涵体形式存在.rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1均分别能与rOmpL1/1兔抗血清和牛GM1结合.89.7;问号钩体野生株含有ompL1基因,87.6;问号钩体野生株分别与rOmpL1/1和rOmpL1/2兔抗血清出现效价,为1:4～1:256的MAT阳性结果.86.8;和88.6;的患者血清标本rOmpL1/1和rOmpL1/2抗体阳性.结论:rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1融合蛋白有良好的免疫原性及与GM1结合的活性.不同问号钩体血清群中广泛存在ompL1基因并高频率表达,不同基因型表达产物有广泛的交叉抗原性.
关键词： 钩端螺旋体,问号;  ompL1基因;  大肠埃希菌;  ltB基因;  霍乱弧菌;  ctB基因;  序列同源性,核酸;  序列同源性,氨基酸;  克隆,分子;  rLTB-rOmpL1/1/免疫学;  rCTB-rOmpL1/1/免疫学    
出版日期: 2005-01-25
基金资助:

国家自然科学基金(39970678)
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阮萍
严杰
毛亚飞
李淑萍
罗依惠
李立伟

引用本文:

阮萍;严杰;毛亚飞;李淑萍;罗依惠;李立伟. rLTB/rCTB-rOmpL1/1融合基因及其原核表达系统的构建和鉴定[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2005, 34(1): 21-26.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2005/V34/I1/21

[1] 夏肖萍，严杰，钊守凤，毛亚飞，李淑萍. 大肠杆菌LTB与霍乱弧菌CTB基因的克隆和表达及鉴定[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2003, 32(1): 17-20.