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浙江大学学报（医学版）
浙江大学学报（医学版）  2005, Vol. 34 Issue (1): 9-14    DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.003
专题报道     
问号钩端螺旋体主要外膜蛋白免疫功能表位及其致炎作用的研究
徐丽慧;严杰;阮萍;毛亚飞
浙江大学医学院,病原生物学教研室,浙江,杭州,310031;绍兴文理学院医学院,浙江,绍兴,312000
Immune-functional epitopes and inflammation-inducing effects of the major outer envelope proteins of Leptospira interrogans
 全文: PDF(259 KB)   HTML ( ) 
摘要：

目的:了解问号钩端螺旋体(简称钩体)主要外膜蛋白OmpL1、LipL32和LipL41免疫功能表位及其致炎作用.方法:建立Ni-NTA亲和层析法,提取不同基因型表达的目的重组蛋白rOmpL1/1和OmpL1/2、LipL32/1和rLipL32/2、LipL41/1和rLipL41/2.采用SDS-PAGE检测上述目的重组蛋白的表达情况和提取物纯度.分别采用Signal P3.0预测服务器Signal P-NN软件、Propred MHC class-Ⅱ binding peptide prediction-ProPred预测服务器EMBOSS软件,对上述蛋白的信号肽、MHC-Ⅱ类分子结合肽和B细胞表位进行分析.以人脐静脉内皮细胞株EVC-304为效应细胞,采用ELISA检测上述目的重组蛋白诱导人脐静脉内皮细胞EVC-304分泌IL-1、IL-8和TNF-α的作用.结果:在IPTG诱导下,所构建的原核表达系统可有效表达rOmpL1/1和rOmpL1/2、rLipL32/1和rLipL32/2、rLipL41/1和rLipL41/2,其产量分别约占细菌总蛋白的30;和15;、40;和35;、15;和10;.提纯后的目的重组蛋白SDS-PAGE后均仅见单一的蛋白条带.OmpL1s、LipL32/1和LipL32/2、LipL41s的信号肽分别位于N端1-24、1-21和1-24、1-24位氨基酸残基.OmpL1s、LipL32s和LipL41s分别有2、2和1个相同的主要MHC-Ⅱ结合肽和B细胞表位,其中OmpL1/2另有1个主要MHC-Ⅱ等位基因结合肽和B细胞表位(59-78).不同浓度的OmpL1s、LipL32s和LipL41s均可明显促进人静脉内皮细胞株EVC-304合成并分泌IL-1α、IL-8和TNF-α(P<0.05).其中IL-1α水平以作用24 h时最高,然后下降;IL-8和TNF-α水平则作用48 h高于24 h.结论:问号钩体ompL1/1、lipL32或lipL41不同基因型的表达产物均存在相似的MHC-Ⅱ类分子结合肽和B细胞表位.rOmpL1/1和OmpL1/2、LipL32/1和rLipL32/2、LipL41/1和rLipL41/2对EVC-304细胞均有直接的致炎作用.
关键词： 钩端螺旋体,问号/致病力;  细菌外膜蛋白/致病力;  免疫显性表位/分析;  细胞因子    
出版日期: 2005-01-25
基金资助:

国家自然科学基金(39970678)
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徐丽慧
严杰
阮萍
毛亚飞

引用本文:

徐丽慧;严杰;阮萍;毛亚飞. 问号钩端螺旋体主要外膜蛋白免疫功能表位及其致炎作用的研究[J]. 浙江大学学报（医学版）, 2005, 34(1): 9-14.

链接本文:

https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2005/V34/I1/9

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