目的:探讨不同毒力的钩体黏附和侵入宿主细胞能力及其病理变化.方法:建立Fontana镀银染色法用于观察问号钩体黄疸出血群赖型56601株、波摩那群波摩那型56608株和双曲钩体三堡隆群patoc型Patoc Ⅰ株黏附Vero和J774A.1细胞的能力;采用电镜技术观察感染细胞的超微结构病变;采用FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术,检测紫外线灭活前后的上述钩体菌株诱导Vero和J774A.1细胞凋亡或坏死的情况.结果:问号钩体56601和56608株对Vero细胞的黏附率分别为24.2;和22.9;(P>0.05);对J774A.1细胞的黏附率分别为49.0;和46.9;(P>0.05);双曲钩体Patoc Ⅰ株不能黏附细胞.两株问号钩体侵入细胞后形成含有钩体的特殊吞噬泡,并引起相似的细胞超微结构病变,如细胞核染色质浓缩或溶解、细胞空泡变性、线粒体肿胀及线粒体嵴消失、内质网肿胀和膜旁核糖体消失等.灭活前的56601和56608株引起的Vero细胞凋亡率分别为84.4;和82.8;,灭活后则分别为77.9;和86.1;.灭活前后的56601株均以诱导Vero细胞晚期凋亡为主,其凋亡率分别68.0;和52.9;.灭活前后的56608株均以诱导Vero细胞早期凋亡为主,其凋亡率分别为64.1;和50.1;.在J774A.1细胞中,紫外线灭活前后的56601和56608株主要引起细胞坏死,其次是细胞凋亡,均以晚期凋亡为主.结论:所建立的Fontana镀银染色法可用于观察问号钩体的细胞黏附.问号钩体以内吞方式侵入细胞,并导致细胞超微结构病变.问号钩体诱导细胞坏死或凋亡可因细胞种类不同而异,与其毒力无明显关系.
国家自然科学基金(30170049)
李立伟;刘云英;严杰;毛亚飞;罗依惠;李淑萍 . 问号钩端螺旋体诱导的Vero和J774A.1细胞的凋亡和超微结构病变[J]. 浙江大学学报(医学版), 2005, 34(1): 4-8.
https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2005/V34/I1/4
Cited