目的:分离和鉴定端粒结合因子(TRF1)免疫共沉淀蛋白复合物并克隆其基因.方法:以TRF1抗体应用免疫共沉淀方法,从细胞蛋白抽提物中分离TRF1蛋白复合物,并作蛋白质肽指纹谱鉴定;应用温度梯度PCR,从人cDNA文库中扩增目的基因,并构建pEGFP-C2真核表达载体;核苷酸测序和Western blot验证目的基因序列和表达载体.结果:从TRF1免疫沉淀复合物中分离出了Tara蛋白;人cDNA文库中PCR扩增所得产物为1.7 kb,与Tara基因CDS序列同源性为99.9;;GFP/Tara融合蛋白约100 kD,Tara在间期HeLa细胞中弥散表达于胞浆,而有丝分裂细胞则定位于整个细胞.结论:Tara是一个可能的TRF1相互作用蛋白,其作用机制需进一步实验研究.
国家重点基础研究发展计划(973计划)(2002CB713700);国家自然科学基金(39870339)
蓝建平;罗依;朱园园;孙洁;来晓瑜;李静远;余建;施继敏;林茂芳;黄河 . 一个可能的与人端粒结合因子相互作用蛋白Tara的分离和克隆[J]. 浙江大学学报(医学版), 2004, 33(6): 486-490.
https://www.zjujournals.com/med/CN/Y2004/V33/I6/486
Cited