目的:克隆大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)及霍乱弧菌肠毒素B亚单位(CTB)基因,构建其表达载体.方法:采用高保真PCR分别从E.coli 44815株与V.cholerae东74株基因组DNA中扩增LTB与CTB基因,T-A克隆后测定核苷酸序列.分别构建pET32a的LTB及CTB表达载体,在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE及GM1-ELISA鉴定表达产物.结果:所克隆的LTB和CTB基因与报道的相应核苷酸序列同源性分别为99.12%～99.71%和98.54%～99.42%,氨基酸序列同源性分别高达97.58%～99.19%和96.77%～99.19%.pET32a-LTB-BL21DE3和pET32a-CTB-BL21DE3系统表达的融合蛋白产量分别占细菌总蛋白的30%和10%左右.GM1-ELISA结果证实LTB及CTB融合蛋白均能与牛GM1结合.结论:本研究成功地构建了LTB与CTB表达系统,所表达的LTB与CTB融合蛋白具有粘膜免疫佐剂活性.