为了解稻水象甲(Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel)精子形成过程,通过扫描电镜照片观察其精子形成过程中部分时期的尾部超微结构.发现该虫精子鞭毛内部由2个线粒体衍生物、2个副体、1个中心粒侧体和1个微管系统(轴丝)构成,轴丝由9个副微管、9对双微管和2个中央微管组成.属典型的9+9+2构型.在精子形成过程中,两线粒体衍生物的形态和内容物有显著差异.中心粒侧体在后期才出现,包围线粒体衍生物、副体、中心粒侧体的微管在后期则全部消失.表明稻水象甲精子的形成过程相似于已报道的一些鞘翅目昆虫,但在线粒体衍生物、中心粒侧体、微管的发生上有其一定的特殊性.
收集马尾松、罗汉松、竹柏、山茶、茶和茶梅等植物的内生和病原拟盘多毛孢菌株,进行形态鉴定,根据rDNA ITS序列分析建立的系统发育树探讨病原与内生拟盘多毛孢之间的相互关系.结果表明,同一个种拟盘多毛孢不论是内生还是病原均聚在系统发育树的同一个分支,如罗氏拟盘多毛孢(Pestalotiopsis lawsoniae)既是马尾松枝条的内生真菌,又是马尾松针叶的病原真菌;卡斯特尼拟盘多毛孢(Pestalotiopsis karstenii)是山茶枝条的内生真菌,在山茶叶片上也是病原真菌;石楠拟盘多毛孢(Pestalotiopsis photiniae)是山茶和茶梅枝务的内生真菌,在马尾松针叶上也是病原真菌;茶拟盘多毛孢(Pestalotiopsis theae)是茶的病原真菌,在金花茶枝叶和罗汉松枝上是内生真菌.说明某些拟盘多毛孢在不同(或相同)的植物或器官中可以表现为内生状态或病原状态,内生拟盘多毛孢在一定条件下可以转变为病原拟盘多毛孢.本研究结果还支持拟盘多毛孢种一般对寄主植物没有专化性的结论.
为了研究表达在蛋清中的重组人组织激肽释放酶(rhKl)是否与天然组织激肽释放酶具有相似的理化特性,对鸡输卵管暂态生物反应器表达的rhKl与猪胰腺组织激肽释放酶(pK)的理化特性进行比较鉴定.Western blotting检测结果显示,表达在蛋清中的rhKl能被人组织激肽释放酶(hKl)特异抗体识别,与pK无交叉反应,rhKl酶原和成熟酶的分子量约为43 kDa和37 kDa.理化鉴定结果显示,rhKl在pH7~10的范围内活性稳定,而pK在pH 8~9的范围内活性较稳定;rhKl和pK均能被Cu2+、Fe3+和Al3+完全抑制;rhKl和pK的热稳定性相似,但rhKl在37℃孵育20 min后被显著激活.以上试验结果表明,表达在蛋清中的rhKl分子量正确,理化特性与猪的天然酶相似,具有开发利用价值.
为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白,利用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆质粒pETXAl中扩增出0.95 kb α毒素基因,将其连接到经Nco I单酶切并用碱性磷酸酶处理的含1.65 kb β1-β2融合基因的重组质粒pETXB1B2上,构建含2.6 kb α-β1-β2融合基因的表达质粒重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1B2).经酶切鉴定和序列测定证实.构建的重组质粒pETXAB1B2含有α-β1-β2融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的α-β1-β2融合蛋白能够被α、β1和β2毒素抗体识别.表达优化结果表明,以IPTG为诱导荆诱导α-β1-β2融合基因表达的优化条件是:培养基PH 7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.4 mmol.L-1,菌体生长密度OD600达到1.0时加入IPTG,诱导时间5 h,此时α-β1-β2融合蛋白表达量为31.2%.免疫试验结果表明,α-β1-β2融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD(最小致死量,minimum lethal dose)C型产气荚膜梭菌标准株C59-44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株.
为确定MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测中华鳖脾淋巴细胞体外转化的条件,对脾淋巴细胞浓度和培养时间、丝裂原种类和浓度等影响因素进行优化.结果显示:2×106 cells.mL-1的脾淋巴细胞用10μg·mL-1Con A(伴刀豆蛋白A)诱导培养120 h或用5μg.mL-1 PHA(植物血凝素)诱导培养144 h,能获得良好的检测效果.研究表明,采用MTT法测定中华鳖脾淋巴细胞体外转化方便可行,可为中华鳖脾淋巴细胞体外转化方面的研究提供参考.
为了解上海市郊一种新外来入侵植物春一年蓬对逆境条件的适应能力,测定不同环境胁迫下营养生长时期春一年蓬的膜相对透性、叶绿素、丙二醛、游离脯氨酸和可溶性糖的舍量以及过氧化物酶的活力.与5℃和22℃处理相比,35℃处理的春一年蓬植株的丙二醛、游离脯氨酸、叶绿素含量、过氧化物酶活力和膜相对透性高.用pH 7的溶液处理的春一年篷植株,其体内的膜相对透性、丙二醛、游离脯氨酸和可溶性糖含量低于用pH 10或pH 4的溶液处理的植株.随着其生长环境中NaCl含量的增加或者干旱胁迫,丙二醛、游离脯氨酸、可溶性糖的含量以及膜相对透性也相应地增加.而且,膜相对透性和丙二醛含量与土壤NaCl含量呈明显的正相关.总之,①与高温环境(35℃)相比,春一年蓬更适合生长于低温(5℃)环境;②中生或湿生环境适合春一年蓬的生长,过酸(pH 4)或过碱环境(pH 10)均会对春一年蓬产生有害影响;③春一年蓬对土壤中的NaCl较敏感,在高NaCl(>0.05 mol.L-1)环境中其丙二醛、膜相对透性等均升高.
为探求碱胁迫影响合欢幼苗生长的生理机制,采用可见分光光度法测定合欢幼苗体内丙二醛含量(MDA)、可溶性糖含量、脯氨酸含量及过氧化氢酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性等生理指标.结果表明,合欢树种的耐碱能力较强,半致死浓度为78.30 mmol·L-1,致死浓度为147.33 mmol.L-1.随着Na2CO3处理浓度的增加,种子萌芽率、发芽指数、活力指数逐步下降,幼苗叶片中MDA、膜相对透性、脯氨酸和可溶性糖含量增加,SOD、POD活性呈先升后降的变化趋势,且随着胁迫时间的延长,MDA、膜相时透性逐步增加,脯氨酸、可溶性糖含量、SOD、POD活性变化无规律,在Na2CO3胁迫初期,膜脂过氧化作用成为主要破坏因素.随着胁迫时间的延长,膜脂过氧化作用受碱胁迫效应的影响逐步降低,而对质膜透性破坏的影响加强;POD、SOD受胁迫效应的影响较小,成为次要保护因素;可溶性糖、脯氨酸调节渗透压成为碱胁迫初期的主要保护因素;随着胁迫的发展,可溶性糖受胁迫效应的影响逐步降低,而对脯氨酸的影响不断加强.
通过对浙江产广义景天属(景天科)26个种的种子形态进行扫描电镜观察,研究其种子微形态特征及其在分类学上的意义.根据种子大小、形状及表面纹饰,可以将这26个种子样品分成5个类型,分别是:瓦松型 Orostachys-type、八宝型 Hylotelephium-type,费菜型Phedimus-type、小山飘风型Filipes-type和景天型Sedum-type.在广义景天属内,这些种子类型可以作为属内次级划分甚至分属的依据.可以用作划分属的是瓦松属Orostachys、八宝属Hylotelephium和费菜属Phedimus,可以用作属内次级划分的有小山飘风组Sedum sect.Filipes和景天组Sedum sect.Sedum.在景天组内,种子表皮细胞表面具乳头状凸起,较为一致.但在一些种之间也存在明显差异,因此也可以作为组内部分分种的依据.苞叶景天系ser.Bracteata 3个种的种子形态很不一致,不是狭义景天属内的一个自然类群.说明种子形态对广义景天属的分类具有重要价值.