"病毒诱导的基因沉默"(virus-induced gene silencing,VIGS)一词最早用于描述被病毒侵染的植物的"恢复"现象,是一种植物抗病毒侵染的自然机制,现在已被开发成通过插入目的基因片段的重组病毒抑制植物内源基因表达的遗传技术,用于基因功能分析VIGS由小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)驱动,siRNA单链与RNA诱导的沉默复合物(RNA induced silencing complex,RISC)结合后,特异性地和与siRNA同源的靶标RNA结合,并降解RNA模板已有源于15种不同类型病毒的VIGS载体得到开发和应用在VIGS栽体中插入的目的片段、重组VIGS病毒载体的植物导入方法、沉默处理时的寄主生育期、沉默处理后的植物培育条件等均显著影响VIGS的效率作为一种新型的基因鉴定和功能研究技术工具,VIGS具有无需事先知道目的基因全长序列、获取表型迅速、无需构建转基因植株等诸多优点,已越来越广泛地被应用于植物基因功能研究

将PCR扩增的烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)Y35分离物βC1基因克隆到pET-32a原核表达载体,构建原核表达重组载体pET32a-Y35βC1重组载体导入大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导、Ni2+NTA亲和柱纯化获得与硫氧还蛋白融合的重组蛋白Y35βC1以Y35βC1重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤细胞技术制备了9株能够稳定传代并分泌抗Y35βCI蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别制备它们的单抗腹水9株单抗腹水的间接ELISA效价在10-5～10-6之间Y35βC1单克隆抗体的研制为该蛋白的亚细胞定位及功能研究,明确Y35βC1基因在致病过程中的作用机理奠定了基础

以双元质粒pBI121为基础分别构建正义、反义和RNA干涉(RNAi)植物表达载体根据pBI121质粒多克隆位点两侧的DNA序列设计1对通用引物,以表达栽体的重组质粒DNA为模板进行PCR扩增,使用限制性内切酶BamH Ⅰ酶切PCR产物以验证扩增条带的真实性,从而可以快速鉴定pBI121表达栽体的重组克隆这种方法也可用于快速鉴定上述表达载体的转基因植株,其检测结果与常规鉴定方法完全一致此外,可以根据需要对表达载体的阳性PCR扩增产物进行测序,测序结果能够精确地显示出重组pBI121表达栽体中目的片段的插入方向以及插入序列是否出现碱基突变本研究为各种pBI121表达载体及其转基因植株的鉴定提供了一种快速、有效的方法

从浙江上虞海涂土样中分离、筛选到1株具有1-氨基环丙烷1-羧酸(ACC)脱氨酶活性的菌株DW1根据生理生化特征、16S rDNA序列分析、(G+C)mol%测定,菌株DW1被鉴定为假单胞茵(Pseudomonas spDW1)研究该菌株对茄子耐盐性的影响,结果表明:用茵株DW1处理可以提高种子的发芽势及芽长;在茄苗盆栽实验中,经DW1菌液处理的种子,在高盐浓度下茄苗的鲜重与对照相比有显著提高,同时Ca2+含量有所增加而Na+含量则有所下降,其茄苗的长势明显优于对照说明用具有ACC脱氨酶活性的菌株DW1处理可以有效地提高茄苗的耐盐性

通过逆转录PCR(RT-PCR及快速扩增cDNA末端(RACE)技术从中国白梨品种'雪花'梨中克隆到S16-RNase基因的全长cDNA序列(GenBank接受号为DQ991388)该cDNA克隆总长1101 bp,包含1个完整的开放阅读框,编码228个氨基酸S16-RNase表现出梨S-RNase基因的基本结构特征,即其具有5个保守区(C1,C2,C3,RC4及C5)和1个高变区在推导氨基酸水平上,S16-RNase与梨其他S-RNase基因的相似性为63%至74%,但与苹果S9-RNase的相似性高达95%通过多序列比对构建进化树,分析梨S16-RNase与蔷薇科植物其他S-RNase基因的遗传进化关系结果表明,S16-RNase与苹果亚科S-RNase基因形成一个亚科特异而非种特异的S-RNase基因类群;且不同S-RNase基因间存在属内种间遗传距离远于属间种问遗传距离现象

为筛选获得适应我国南方夏季高温的生防菌株,将不同寄主和产地的12株球孢白僵菌(Beauveria bassiana)分生孢子分别悬浮于1 mL萌发液中,接受48℃恒温水浴的热胁迫以逻辑斯蒂方程拟合孢子萌发率随热胁迫时间的衰变过程,将孢子活力丧失一半所需的时间(LT50)作为各菌株对热胁迫反应的特征指标结果表明,对所有测试的球孢白僵菌株,孢子的残存指数均随胁迫时间延长而降低,且供试菌株之间差异显著所测菌株孢子的LT50平均值为126 min(67～212 min),仅1株的LT50高于20min,有4株的LT50低于10 min由此建立的技术体系可用于客观评价各种生防真菌的孢子耐热力

利用同一PCR反应体系,对分别与番茄抗根结线虫的Mi-1基因和抗番茄叶霉病的Cf-9基因紧密连锁的CAPS(cleaved amplified polymorphic sequences)标记进行同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段吻合与Cf-9基因紧密连锁的CAPSl标记在抗病试材中可扩增出2775 bp的特异片段,且存在Taq I酶切位点,酶切后产生1177 bp、446 bp、370 bp和160 bp的不同特异片段;与Mi-1基因紧密连锁的CAPS2为共显性标记,抗性材料中产生915 bp的特异片段,Taq I酶切后产生719bp和196 bp的特异片段该体系可用于在同一PCR反应体系中对Mi-1和Cf-9 2个抗病基因进行同时筛选鉴定该体系的建立不仅省时、省工,节省费用,而且可用于苗期早期辅助选育,加快番茄育种进程

为建立从奶品中监控布氏杆茵感染的方法,根据牛布氏杆菌omp25、omp31和16S rRNA基因序列设计内、外向引物,优化牛奶样品中布氏杆菌基因组DNA提取方法,建立牛奶样品布氏杆菌套式PCR方法结果显示,使用人工合成的两对F4/R2和F2D/R1U套式引物,通过两次扩增,可有效扩增出牛奶中污染布氏杆菌的16S rRNA的特异性DNA片段,其对牛奶样品中布氏杆菌检测下限达33CFUmL-1.该套式PCR与大肠杆菌、溶血性链球菌、沙门氏茵、克雷伯氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和螺旋杆菌等相关细菌DNA无交叉反应,显示高度的布氏杆菌特异性,其与布氏杆菌分离鉴定的符合率达100%本试验建立的布氏杆菌套式PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,适用于牛奶样品中布氏杆菌的实验室快速检测

研究制备能有效用于金霉素残留检测的特异性多克隆抗体采用戊二醛法和混合酸酐法合成2种不同的金霉素-BSA完全抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,应用ELISA法鉴定抗金霉素多克隆抗体结果表明,2种血清的抗体效价最高均达32×105,而戊二醛法制备的抗原产生的抗体具有更高的亲和力,抑制率为50%时的金霉素的质量浓度(IC50)为962 μg·mL-1,金霉素的最低检测限为667 ng·mL-1,金霉素和四环素的交叉反应率为77%研究结果为畜产品中四环素类抗生素残留的检测奠定了较好的基础

为了观察雌激素对离体培养神经元的生长发育及神经分泌的影响,取1日龄SD大鼠,对小脑神经细胞进行培养,通过补充17β-雌二醇观察神经细胞生长发育情况及运用免疫组织化学SP法研究雌激素受体(ER)、神经生长因子(NGF)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达变化结果表明,雌激素对体外培养小脑神经元的生长、发育影响显著,可促进胞体的生长、突起的伸长;延长培养神经元的存活时间,阻止神经元的退化、萎缩和死亡雌激素对体外培养小脑神经元的神经分泌功能影响显著,可促进培养神经元ER、NGF和ChAT的表达,显著增加ER、NGF和chAT阳性神经元的数量并呈现出培养时间依赖性的变化说明雌激素通过ER可直接或间接地作用于培养神经元,发挥神经营养和调控神经信息传递的作用

为确定小果博落回生物碱的杀虫作用方式和杀虫谱,室内测定小果博落回生物碱对粘虫3龄幼虫、菜青虫5龄幼虫、小菜蛾3龄幼虫、棉铃虫3龄幼虫、桃蚜和麦二叉蚜无翅成虫的杀虫活性.结果表明:小果博落回生物碱对试虫具有拒食、胃毒和杀卵等多种作用方式,其中,对粘虫、菜青虫和小菜蛾48 h AFC50值和96 h LC50值分别为0265、0557、0543 g·L-1和0106、0123、0166 g·L-1;对桃蚜和麦二叉蚜有较高的触杀作用,48 h LC50值分别为0362、0710 g·L-1;对棉铃虫3龄幼虫具有一定的生长发育抑制作用,7 d的生长抑制率为695%(5 g·L-1);此外,对粘虫还具有一定的杀卵作用,5 d的卵孵化率和幼虫存活率仅为588%和226%(25 g·L-1).

为探究与玉簪属植物花叶性状稳定遗传有关的嵌合体特性,以性状稳定并具应用价值的花叶玉簪品种Hosta 'So Sweet'为材料,对叶片不同色块的生理和形态解剖学进行研究,并比较与野生种紫萼Hventricosa叶片的差异结果表明,花叶玉簪叶片黄色部分的叶绿素a、叶绿素总含量均显著低于叶片其他部分和紫萼叶片,而叶绿素b含量明显较高;花叶玉簪比紫萼多1条酯酶同工酶谱带,可能为特异性条带;叶绿体超微结构中,从绿色部分一过渡色部分一黄色部分出现由椭圆形转变为圆形、基粒类囊体肿胀、囊泡产生和噬锇颗粒增多的现象

进行两个试验考察饲料中添加杜仲叶提取物对异育银鲫生长、血清非特异性免疫和肌肉品质的影响试验一:采用平均体重为(240±20)g的异育银鲫鱼种,在基础饲料中分别添加00%(对照组)、01%、015%和02%杜仲叶提取物,饲养8周后,各组异育银鲫增重率分别为1249%、1279%、1410%、1232%,其中添加015%杜仲叶提取物较对照组显著提高鱼体增重率,降低饲料系数(P<005);对血清非特异性免疫指标的测定表明:添加01%、015%、02%杜仲叶提取物可在不同程度上提高血清超氧化物歧化酶(superoxide dismulasc,SOD)、溶茵酶(lysozyme,LSZ)和碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase,AKP),其中添加015%杜仲叶提取物对血清非特异性免疫指标的影响最显著;在肌肉品质方面,添加015%杜仲叶提取物可提高肌肉粗蛋白含量和肌肉耐折力(P<005),降低肌纤维直径和肌肉失水率(P<005)试验二:在基础饲料(含05%Cr2O3)中分别添加00%(对照组)、01%、015%和02%杜仲叶提取物,饲养平均体重为(553±35)g的异育银鲫,测定饲料营养物质消化率及肠道蛋白酶活性结果表明:添加015%杜仲叶提取物可显著提高异育银鲫粗蛋白消化率、干物质消化率和肠道蛋白酶活性(P<005)上述结果表明,饲料中添加015%杜仲叶提取物可提高异育银鲫对营养物质的消化率,促进生长,提高血清非特异性免疫力,改善肌肉品质

采用化学测试方法研究杭州市郊25个典型菜园土壤的磷素状况以及农学和环境磷素测试值间的相互关系,以建立磷素淋失的评价指标结果表明,菜园土壤全磷(TP)和土壤测试磷如水溶性磷(CaCl2-P)、速效磷(Olsen-P)、Mehlich Ⅲ提取的磷(PM3)均存在较大的变幅,分别为07～29 gkg-1、048～1964 mgkg-1、1065～15160 mgkg-1和5053～90495 mgkg-1,72%的土壤超过菜园土磷素丰缺的有效磷临界值(Olsen-P＝60 mg·kg-1)草酸浸提的土壤磷饱和度(DPSox)和Mehlich Ⅲ浸提的土壤磷饱和度(DPSM3)分别在691%～4915%和582%～5256%之间,与TP、Olsen-P、PM3之间存在极显著的正相关,DPSox与DPSM3间存在极显著正相关通过分段线性模型分析水溶性磷与Olsen-P、DPSox和DPSm3的关系,均存在一个明显的突变点(土壤磷素淋失的临界值),该值分别为Olsen-P＝7619 mg·kg-1,DPSox＝26%,DPSM3＝22%,供试土壤中超过上述Olsen-P或者DPS临界值的占60%以上,存在磷素淋溶的风险土壤磷素淋失的Olsen-P临界值高于农学磷素丰缺的临界值,因此,合理施用磷肥和有机肥使土壤磷水平低于上述磷素淋失临界值,不仅可以满足作物的磷素营养需要,而且可以避免磷淋溶进入水体

采用平衡培养方法,研究模拟酸雨对菜园土壤施用富含重金属猪粪后重金属释放的影响结果表明,pH 36的模拟酸雨培养10 d可导致菜园土壤明显酸化,土壤溶液中Cu、Zn、Cd、Pb等重金属浓度和累积释放量显著高于pH 56的对照溶液,其中Zn和Cd的差异尤为明显,As的情况则相反尽管施用富含重金属的猪粪能缓解土壤的酸化,但菜园土壤培养液中重金属浓度显著高于对照,尤其是Zn和Cd可见,在酸雨沉降频繁的地区大量施用富含重金属的畜禽粪便,将会增加重金属对蔬菜和生态环境污染的风险

为了对镇江市滨江湿地生态系统进行保护与修复,改善湿地功能与效益,提高湿地生产量,于2006年3月起,在长江中下游镇江内江南岸北固山-大东沟湿地,对优势植物种群芦苇和虉草及其各器官的热值、能量现存量、年净初级生产力及光能利用效率动态进行研究结果表明:(1)芦苇、虉草及其器官的热值都随着生育期而略有提高,但变化较为平缓芦苇热值在1795324～1845262 J·g-1之间变化,虉草热值变化范围在1770251～1829172 J·g-1;之间;(2)全年群落能量现存量随时问而增加,并与生物量增长趋势相一致;(3)滨江湿地生态系统年能量净初级生产力为2935506 kJ·m-2年-1,不同种群器官构件的能量生产与分配的季节动态也有差异;(4)芦苇、虉草种群的年光能利用率分别为130%和033%说明植物光合作用积累能量的动态变化与群落生产力变化机制密不可分

在分析土地利用社会经济效益与生态环境效益相互关系的基础上,借助于系统科学理论建立起土地利用社会经济效益与生态环境效益之间的耦合模型,用耦合度来表达这两种效益之间的协调关系与程度土地利用效益之间的耦合关系为一椭圆轨迹,系统演化经历低级共生、协调发展、极限发展、再生发展4个阶段以广州市为例,对沿海地区土地利用效益之间的耦合规律进行实证研究结果表明:1990-2005年期间,广州市土地利用社会经济效益处于持续上升状态,而生态环境效益波动较大,最近几年处于上升状态在此期间,广州市土地利用效益的耦合度表现为一条抛物线,总体处于协调发展阶段1994年以前,耦合度处于下降状态,1994年以后,耦舍度处于上升状态上世纪90年代中后期土地利用效益处于最佳耦合状态,最近几年耦合程度有所下降